醋酸纤维素膜
孔径0.22μm的微孔滤膜：被认为是最佳的标准选择。
形状：切成5mm的细条（一端方形，一端锥形）。在表面做标记以便定向。
用于PCR（聚合酶链反应）：使用直径10mm的圆形滤膜。
印迹细胞学
一目了然的要点
Section titled “一目了然的要点”1. 什么是印迹细胞学？
Section titled “1. 什么是印迹细胞学？”印迹细胞学是一种低侵入性检查方法，将醋酸纤维素滤纸贴附于眼表，收集表层上皮细胞，进行组织学、免疫组织化学和分子生物学分析。
1977年，Egbert等人为研究结膜杯细胞建立了该技术，后经Tseng改进，使其在眼表疾病的临床应用中得以推广。
病理诊断大致分为组织学和细胞学。细胞学因无法提供组织结构信息而被视为组织学的辅助检查，但在眼部，由于组织学检查创伤较大，细胞学检查具有很高的实用性。
2. 主要发现与临床意义
Section titled “2. 主要发现与临床意义”由于印迹细胞学是一种检查方法，而非针对“症状”的疾病，本节描述在采集标本中观察到的发现及其临床意义。
- 正常结膜上皮细胞：扁平，核明显，核/质比低。
- 角膜缘上皮细胞：较小且排列紧密，核/质比高。
- 正常结膜杯状细胞：分布于整个结膜，从上皮基底层向表面增大。集中存在于鼻下侧象限。
- 杯状细胞减少：在眼类天疱疮、史蒂文斯-约翰逊综合征、重度化学外伤、干眼中发生上皮化生，杯状细胞数量减少。
- 角化上皮细胞出现：在上角膜缘角结膜炎、眼类天疱疮、史蒂文斯-约翰逊综合征中角化进展。
- 角膜上出现杯状细胞：角膜缘干细胞缺乏症中发生结膜化，原本不存在的杯状细胞出现在角膜表面。
- 多形性色素上皮细胞：提示眼表面鳞状上皮肿瘤的所见1)。
- 炎症细胞：活动性炎症的指标。
3. 适应症与风险因素
Section titled “3. 适应症与风险因素”印迹细胞学适用于以下广泛的疾病和病症。
眼表疾病
- 干燥性角结膜炎/干眼综合征
- 特应性角结膜炎/过敏性鼻结膜炎
- 维生素A缺乏症
- 角膜缘干细胞缺乏症
- 眼类天疱疮/史蒂文斯-约翰逊综合征
- 上缘角结膜炎
- 黏多糖贮积症
- 治疗性角膜切除术（PTK）后评估
- 棘阿米巴角膜炎
- 病毒/衣原体感染
- 囊性纤维化
- 滤过泡评估/隐形眼镜佩戴评估
肿瘤
- 眼表面鳞状上皮肿瘤
- 结膜鳞状化生
- 结膜黑变病
与眼表鳞状上皮肿瘤相关的风险因素
Section titled “与眼表鳞状上皮肿瘤相关的风险因素”眼表鳞状上皮肿瘤分为结膜上皮内瘤变（CIN）和浸润性鳞状细胞癌。主要风险因素如下。
- UV-B光：最大的风险因素。好发于角膜缘，扩散至角膜表面和球结膜。
- 人乳头瘤病毒16型和18型：已显示人乳头瘤病毒的参与。
- 免疫缺陷：HIV/AIDS患者中眼表鳞状上皮肿瘤的发生率较高。
- 遗传易感性：着色性干皮病中鳞状细胞癌的发病率高。
4. 检查技术与方法
Section titled “4. 检查技术与方法”- 使用0.5%丙美卡因等滴眼麻醉（也可在无麻醉下进行）。
- 放置开睑器，干燥采集部位。
- 擦去多余的泪液和药物，以提高滤纸的粘附效率。
滤纸的种类和形状
Section titled “滤纸的种类和形状”比较滤纸的类型。
硝酸纤维素膜
梯形条状（约3×6mm）：标准形状。
需要区分正反面：光滑面为正面。将反面（粗糙面）贴附于结膜上皮。
免疫组织化学：硝酸纤维素膜适用。
Biopore膜
用于角膜缘干细胞缺乏症的诊断：与醋酸纤维素、硝酸纤维素一样是可选方案。
共同特性：可采集1~3层表面上皮细胞。
- 用玻璃棒或Goldmann压平眼压计头，将滤膜轻轻压在眼表面5~10秒。
- 保持眼睑不接触滤纸。
- 注意：被泪液浸湿后采集效率会降低。
- 通常采集1~3层眼表面上皮细胞。
- 通过牢固粘附，可以采集数层复层化的细胞片。
常规染色方法
Section titled “常规染色方法”- 过碘酸雪夫（PAS）反应：10%福尔马林固定后进行。杯细胞染成红紫色。角结膜上皮基底膜、杯细胞、后弹力层、晶状体囊等也被染色。
- 苏木精-伊红染色：95%乙醇固定后，苏木精+伊红处理30秒→丁醇脱水→丁醇+二甲苯透明→二甲苯过夜。
- 巴氏染色：广泛用作细胞学的常规染色方法。
- 吉姆萨染色：用于感染评估。革兰染色在怀疑细菌或真菌时选择。
特殊染色与技术
Section titled “特殊染色与技术”- 电镜用：1%戊二醛+钌红+4%磷酸缓冲甲醛固定→锇酸后固定→脱水→树脂包埋。
- 免疫组织化学用：用硝酸纤维素膜采集→喷雾固定→转印到多聚赖氨酸包被玻片上→丙酮1小时溶解膜→37°C 2小时消化纤维素→进行免疫细胞化学染色。注意：二甲苯会破坏细胞表面抗原，故不使用。
检查后注意事项
Section titled “检查后注意事项”采集部位会出现上皮缺损，回家后可能引起眼痛。事先向患者说明，并开具角膜保护剂滴眼液。
5. 临床应用与判定
Section titled “5. 临床应用与判定”眼表疾病的评估
Section titled “眼表疾病的评估”各疾病的印迹细胞学检查结果如下所示。
角膜缘干细胞缺乏症的诊断
Section titled “角膜缘干细胞缺乏症的诊断”在角膜缘干细胞缺乏症的诊断中，有观点认为印迹细胞学是金标准（但临床上并未广泛使用）。
角膜上出现杯细胞是结膜化的直接证据，可作为诊断依据。将滤纸应用于角膜中央部，确认杯细胞的有无。
各肿瘤诊断中印迹细胞学的预测精度如下所示。
| 疾病 | 诊断预测精度 |
|---|---|
| 眼表鳞状上皮肿瘤（组织学诊断） | 80% |
| 中度异型增生 | 77% |
| 棘阿米巴角膜炎 | 94.6% |
眼表鳞状上皮肿瘤确诊的金标准是切除活检。印迹细胞学和脱落细胞学难以区分浅表病变和浸润性病变，因此不用于确诊。
在慢性春季角结膜炎背景下发生的眼表鳞状上皮肿瘤，与假上皮瘤样增生难以鉴别。如果印迹细胞学检测到多形性色素上皮细胞，可能是怀疑眼表鳞状上皮肿瘤的线索1)。
Q
印迹细胞学能否确诊眼表鳞状上皮肿瘤？
A
组织学诊断预测准确率为80%，确诊需要切除活检。由于印迹细胞学难以区分浸润性病变和上皮内病变，因此被视为辅助诊断工具。
6. 病理生理学（检查原理）
Section titled “6. 病理生理学（检查原理）”醋酸纤维素滤膜通过将眼表上皮的最表层（1-3层）连同黏液分泌物一起剥离并采集。
当滤膜牢固粘附时，可以采集数层复层细胞片，从而二维评估细胞的形态、分布和密度。
在正常结膜上，杯状细胞分布于整个结膜。慢性炎症和重度干眼会破坏杯状细胞，导致上皮化生（鳞状化生）。角膜缘干细胞缺乏症中，缘部干细胞耗竭导致角膜上皮补充功能丧失，结膜上皮覆盖角膜表面，形成“结膜化”。印迹细胞学在角膜上发现杯状细胞是这种结膜化的证据。
7. 最新研究与未来展望（研究阶段报告）
Section titled “7. 最新研究与未来展望（研究阶段报告）”与无创诊断方式的比较
Section titled “与无创诊断方式的比较”印迹细胞学虽然微创，但会在采集部位造成上皮缺损，因此并非完全无创的检查。近年来，以下新的检查方式正在发展。
各诊断方式的特点如下所示。
| 检查方式 | 特点 | 备注 |
|---|---|---|
| 印迹细胞学 | 可评估杯状细胞和免疫组织化学 | 仅评估1~3层；存在上皮缺损 |
| 活体共聚焦显微镜 | 以1~10 μm分辨率进行细胞定量 | 需要患者配合5~15分钟 |
| 高分辨率光学相干断层扫描 | 区分浸润性与上皮内病变 | 上皮厚度>120 μm提示浸润 |
活体共聚焦显微镜能够以110微米的分辨率观察体内角膜和结膜细胞。它可以进行细胞定量，但需要患者配合515分钟。
高分辨率光学相干断层扫描（高分辨率眼前节OCT）通过识别上皮增厚（超过120微米），被认为有助于区分浸润性和上皮内病变。
关于眼表鳞状上皮肿瘤药物治疗的研究
Section titled “关于眼表鳞状上皮肿瘤药物治疗的研究”对于眼表鳞状上皮肿瘤，已研究了多种药物治疗，包括丝裂霉素C 0.04%、5-氟尿嘧啶、干扰素α-2b、抗VEGF药物和西多福韦，但尚未建立官方指南。
在一例以慢性春季角结膜炎为背景的24岁男性眼表鳞状上皮肿瘤中，印迹细胞学检测到多形性色素上皮细胞，经过两个周期的丝裂霉素C 0.04%治疗后确认肿瘤缩小。随后的切除活检（包括4毫米切缘、无接触技术、冷冻疗法和羊膜移植）病理显示轻至中度异型增生，6个月随访期间未见复发1)。印迹细胞学也被认为可用于丝裂霉素C治疗后的监测。
Q
是否有新的检查方法可以替代印迹细胞学？
A
活体共聚焦显微镜和高分辨率光学相干断层扫描是正在发展的非侵入性检查手段。高分辨率OCT以上皮增厚（>120微米）为指标，被认为有助于区分浸润性病变，但两者仍包含研究阶段的内容。印迹细胞学在识别杯状细胞和进行免疫组织化学染色方面仍具有独特价值。
8. 参考文献
Section titled “8. 参考文献”- Ghosh Dastidar A, Khedia D, Goel S. Ocular surface squamous neoplasia masquerading as pseudoepitheliomatous hyperplasia in chronic vernal keratoconjunctivitis. GMS Ophthalmol Cases. 2024;14:Doc03.
- Tsatsos M, Delimitrou C, Tsinopoulos I, Ziakas N. Update in the Diagnosis and Management of Ocular Surface Squamous Neoplasia (OSSN). J Clin Med. 2025;14:1699.
- Siu GDY, Young AL, Cheng LL. Limbal stem cell deficiency: diagnosis and non-surgical management. Ann Eye Sci. 2023;8:13.