醋酸纤维素膜
孔径0.22μm的微孔滤膜：被认为是最佳的标准选择。
形状：切成5mm的细条（一端方形，一端锥形）。在表面做标记以便定向。
用于PCR（聚合酶链反应）：使用直径10mm的圆形滤膜。
印迹细胞学
一目了然的要点
Section titled “一目了然的要点”1. 什么是印迹细胞学？
Section titled “1. 什么是印迹细胞学？”印迹细胞学是一种低侵入性检查方法，将醋酸纤维素滤纸贴附于眼表，收集表层上皮细胞，进行组织学、免疫组织化学和分子生物学分析。
1977年，Egbert等人为研究结膜杯细胞建立了该技术，后经Tseng改进，使其在眼表疾病的临床应用中得以推广。
病理诊断大致分为组织学和细胞学。细胞学因无法提供组织结构信息而被视为组织学的辅助检查，但在眼部，由于组织学检查创伤较大，细胞学检查具有很高的实用性。
2. 主要发现与临床意义
Section titled “2. 主要发现与临床意义”由于印迹细胞学是一种检查方法，而非针对“症状”的疾病，本节描述在采集标本中观察到的发现及其临床意义。
- 正常结膜上皮细胞：扁平，核明显，核/质比低。
- 角膜缘上皮细胞：较小且排列紧密，核/质比高。
- 正常结膜杯状细胞：分布于整个结膜，从上皮基底层向表面增大。集中存在于鼻下侧象限。
- 杯状细胞减少：在眼类天疱疮、史蒂文斯-约翰逊综合征、重度化学外伤、干眼中发生上皮化生，杯状细胞数量减少。
- 角化上皮细胞出现：在上角膜缘角结膜炎、眼类天疱疮、史蒂文斯-约翰逊综合征中角化进展。
- 角膜上出现杯状细胞：角膜缘干细胞缺乏症中发生结膜化，原本不存在的杯状细胞出现在角膜表面。
- 多形性色素上皮细胞：提示眼表面鳞状上皮肿瘤的所见1)。
- 炎症细胞：活动性炎症的指标。
3. 适应症与风险因素
Section titled “3. 适应症与风险因素”印迹细胞学适用于以下广泛的疾病和病症。
眼表疾病
- 干燥性角结膜炎/干眼综合征
- 特应性角结膜炎/过敏性鼻结膜炎
- 维生素A缺乏症
- 角膜缘干细胞缺乏症
- 眼类天疱疮/史蒂文斯-约翰逊综合征
- 上缘角结膜炎
- 黏多糖贮积症
- 治疗性角膜切除术（PTK）后评估
- 棘阿米巴角膜炎
- 病毒/衣原体感染
- 囊性纤维化
- 滤过泡评估/隐形眼镜佩戴评估
肿瘤
- 眼表面鳞状上皮肿瘤
- 结膜鳞状化生
- 结膜黑变病
与眼表鳞状上皮肿瘤相关的风险因素
Section titled “与眼表鳞状上皮肿瘤相关的风险因素”眼表鳞状上皮肿瘤分为结膜上皮内瘤变（CIN）和浸润性鳞状细胞癌。主要风险因素如下。
- UV-B光：最大的风险因素。好发于角膜缘，扩散至角膜表面和球结膜。
- 人乳头瘤病毒16型和18型：已显示人乳头瘤病毒的参与。
- 免疫缺陷：HIV/AIDS患者中眼表鳞状上皮肿瘤的发生率较高。
- 遗传易感性：着色性干皮病中鳞状细胞癌的发病率高。
4. 检查技术与方法
Section titled “4. 检查技术与方法”- 使用0.5%丙美卡因等滴眼麻醉（也可在无麻醉下进行）。
- 放置开睑器，干燥采集部位。
- 擦去多余的泪液和药物，以提高滤纸的粘附效率。
滤纸的种类和形状
Section titled “滤纸的种类和形状”比较滤纸的类型。
硝酸纤维素膜
梯形条状（约3×6mm）：标准形状。
需要区分正反面：光滑面为正面。将反面（粗糙面）贴附于结膜上皮。
免疫组织化学：硝酸纤维素膜适用。
Biopore膜
用于角膜缘干细胞缺乏症的诊断：与醋酸纤维素、硝酸纤维素一样是可选方案。
共同特性：可采集1~3层表面上皮细胞。
- 用玻璃棒或Goldmann压平眼压计头，将滤膜轻轻压在眼表面5~10秒。
- 保持眼睑不接触滤纸。
- 注意：被泪液浸湿后采集效率会降低。
- 通常采集1~3层眼表面上皮细胞。
- 通过牢固粘附，可以采集数层复层化的细胞片。
常规染色方法
Section titled “常规染色方法”- 过碘酸雪夫（PAS）反应：10%福尔马林固定后进行。杯细胞染成红紫色。角结膜上皮基底膜、杯细胞、后弹力层、晶状体囊等也被染色。
- 苏木精-伊红染色：95%乙醇固定后，苏木精+伊红处理30秒→丁醇脱水→丁醇+二甲苯透明→二甲苯过夜。
- 巴氏染色：广泛用作细胞学的常规染色方法。
- 吉姆萨染色：用于感染评估。革兰染色在怀疑细菌或真菌时选择。
特殊染色与技术
Section titled “特殊染色与技术”- 电镜用：1%戊二醛+钌红+4%磷酸缓冲甲醛固定→锇酸后固定→脱水→树脂包埋。
- 免疫组织化学用：用硝酸纤维素膜采集→喷雾固定→转印到多聚赖氨酸包被玻片上→丙酮1小时溶解膜→37°C 2小时消化纤维素→进行免疫细胞化学染色。注意：二甲苯会破坏细胞表面抗原，故不使用。
检查后注意事项
Section titled “检查后注意事项”采集部位会出现上皮缺损，回家后可能引起眼痛。事先向患者说明，并开具角膜保护剂滴眼液。
5. 临床应用与判定
Section titled “5. 临床应用与判定”眼表疾病的评估
Section titled “眼表疾病的评估”各疾病的印迹细胞学检查结果如下所示。
角膜缘干细胞缺乏症的诊断
Section titled “角膜缘干细胞缺乏症的诊断”在角膜缘干细胞缺乏症的诊断中，有观点认为印迹细胞学是金标准（但临床上并未广泛使用）。
角膜上出现杯细胞是结膜化的直接证据，可作为诊断依据。将滤纸应用于角膜中央部，确认杯细胞的有无。
各肿瘤诊断中印迹细胞学的预测精度如下所示。
| 疾病 | 诊断预测精度 |
|---|---|
| 眼表鳞状上皮肿瘤（组织学诊断） | 80% |
| 中度异型增生 | 77% |
| 棘阿米巴角膜炎 | 94.6% |
眼表鳞状上皮肿瘤确诊的金标准是切除活检。印迹细胞学和脱落细胞学难以区分浅表病变和浸润性病变，因此不用于确诊。
在慢性春季角结膜炎背景下发生的眼表鳞状上皮肿瘤，与假上皮瘤样增生难以鉴别。如果印迹细胞学检测到多形性色素上皮细胞，可能是怀疑眼表鳞状上皮肿瘤的线索1)。
Q
印迹细胞学能否确诊眼表鳞状上皮肿瘤？
A
组织学诊断预测准确率为80%，确诊需要切除活检。由于印迹细胞学难以区分浸润性病变和上皮内病变，因此被视为辅助诊断工具。
6. 病理生理学（检查原理）
Section titled “6. 病理生理学（检查原理）”醋酸纤维素滤膜通过将眼表上皮的最表层（1-3层）连同黏液分泌物一起剥离并采集。
当滤膜牢固粘附时，可以采集数层复层细胞片，从而二维评估细胞的形态、分布和密度。
在正常结膜上，杯状细胞分布于整个结膜。慢性炎症和重度干眼会破坏杯状细胞，导致上皮化生（鳞状化生）。角膜缘干细胞缺乏症中，缘部干细胞耗竭导致角膜上皮补充功能丧失，结膜上皮覆盖角膜表面，形成“结膜化”。印迹细胞学在角膜上发现杯状细胞是这种结膜化的证据。
7. 最新研究与未来展望（研究阶段报告）
Section titled “7. 最新研究与未来展望（研究阶段报告）”与无创诊断方式的比较
Section titled “与无创诊断方式的比较”印迹细胞学虽然微创，但会在采集部位造成上皮缺损，因此并非完全无创的检查。近年来，以下新的检查方式正在发展。
各诊断方式的特点如下所示。
| 检查方式 | 特点 | 备注 |
|---|---|---|
| 印迹细胞学 | 可评估杯状细胞和免疫组织化学 | 仅评估1~3层；存在上皮缺损 |
| 活体共聚焦显微镜 | 以1~10 μm分辨率进行细胞定量 | 需要患者配合5~15分钟 |
| 高分辨率光学相干断层扫描 | 区分浸润性与上皮内病变 | 上皮厚度>120 μm提示浸润 |
活体共聚焦显微镜能够以110微米的分辨率观察体内角膜和结膜细胞。它可以进行细胞定量，但需要患者配合515分钟。
高分辨率光学相干断层扫描（高分辨率眼前节OCT）通过识别上皮增厚（超过120微米），被认为有助于区分浸润性和上皮内病变。
关于眼表鳞状上皮肿瘤药物治疗的研究
Section titled “关于眼表鳞状上皮肿瘤药物治疗的研究”对于眼表鳞状上皮肿瘤，已研究了多种药物治疗，包括丝裂霉素C 0.04%、5-氟尿嘧啶、干扰素α-2b、抗VEGF药物和西多福韦，但尚未建立官方指南。
在一例以慢性春季角结膜炎为背景的24岁男性眼表鳞状上皮肿瘤中，印迹细胞学检测到多形性色素上皮细胞，经过两个周期的丝裂霉素C 0.04%治疗后确认肿瘤缩小。随后的切除活检（包括4毫米切缘、无接触技术、冷冻疗法和羊膜移植）病理显示轻至中度异型增生，6个月随访期间未见复发1)。印迹细胞学也被认为可用于丝裂霉素C治疗后的监测。
Q
是否有新的检查方法可以替代印迹细胞学？
8. 参考文献
Section titled “8. 参考文献”- Ghosh Dastidar A, Khedia D, Goel S. Ocular surface squamous neoplasia masquerading as pseudoepitheliomatous hyperplasia in chronic vernal keratoconjunctivitis. GMS Ophthalmol Cases. 2024;14:Doc03.
- Tsatsos M, Delimitrou C, Tsinopoulos I, Ziakas N.. Update in the Diagnosis and Management of Ocular Surface Squamous Neoplasia (OSSN). J Clin Med. 2025;14(5):1699. doi:10.3390/jcm14051699. PMID:40095695; PMCID:PMC11900158.
- Siu GDY, Young AL, Cheng LL. Limbal stem cell deficiency: diagnosis and non-surgical management. Ann Eye Sci. 2023;8:13.