Sitologi impresi adalah pemeriksaan invasif minimal dengan mengaplikasikan kertas saring selulosa asetat ke permukaan mata untuk mengambil sel epitel superfisial, kemudian dilakukan analisis histologis, imunohistokimia, dan molekuler.
Pada tahun 1977, Egbert dkk. mengembangkan teknik ini untuk penelitian sel goblet konjungtiva, kemudian disempurnakan oleh Tseng sehingga aplikasi klinisnya meluas untuk penyakit permukaan mata.
Diagnosis patologis dibagi menjadi diagnosis jaringan dan diagnosis sitologi. Sitologi dianggap sebagai pemeriksaan tambahan karena tidak memberikan informasi struktur jaringan, tetapi pada mata, karena diagnosis jaringan sangat invasif, sitologi memiliki kegunaan tinggi.
Pada sitologi impresi, epitel diangkat dengan kertas saring dan sel diambil sebagai lembaran dua dimensi. Pada apusan konjungtiva, dilakukan kerokan dengan kapas atau spatula sitologi. Sitologi impresi unggul dalam mengevaluasi distribusi dan kepadatan sel goblet.
Karena sitologi impresi adalah metode pemeriksaan, bukan penyakit yang didiagnosis berdasarkan gejala, bagian ini menjelaskan temuan yang diamati pada spesimen dan signifikansi klinisnya.
Sitologi impresi diterapkan pada berbagai penyakit dan kondisi berikut.
Penyakit permukaan okular
Tumor
Tumor permukaan okular epitel skuamosa diklasifikasikan menjadi neoplasia intraepitelial konjungtiva (CIN) dan karsinoma sel skuamosa invasif. Faktor risiko utama adalah sebagai berikut:
Membandingkan jenis kertas saring.
Membran selulosa asetat
Filter Millipore dengan pori 0,22 μm: Pilihan standar terbaik.
Bentuk: Dipotong menjadi potongan 5 mm (satu ujung persegi, satu ujung meruncing). Beri tanda pada permukaan untuk orientasi.
Untuk aplikasi PCR (Polymerase Chain Reaction): Gunakan filter bundar berdiameter 10 mm.
Membran nitroselulosa
Bentuk trapesium (sekitar 3×6 mm): Bentuk standar.
Perlu dibedakan sisi depan dan belakang: Sisi halus adalah sisi depan. Sisi belakang (kasar) ditempelkan ke epitel konjungtiva.
Imunohistokimia: Membran nitroselulosa cocok.
Membran Biopore
Aplikasi dalam diagnosis penyakit defisiensi sel punca limbus kornea: Pilihan bersama selulosa asetat dan nitroselulosa.
Karakteristik umum: Dapat mengumpulkan 1-3 lapisan epitel permukaan.
Area pengambilan akan menjadi defek epitel, dan dapat menyebabkan nyeri mata setelah pulang. Jelaskan kepada pasien sebelumnya dan resepkan tetes pelindung kornea.
Karena terjadi defek epitel di lokasi pengambilan sampel, pasien mungkin merasakan nyeri mata setelah pulang. Hal ini harus dijelaskan sebelum pemeriksaan, dan tetes pelindung kornea diresepkan untuk mengatasinya. Dalam banyak kasus, defek akan sembuh secara spontan dalam beberapa hari.
Berikut adalah temuan sitologi impresi untuk berbagai penyakit permukaan mata.
Dalam diagnosis defisiensi sel punca limbus kornea, beberapa ahli menganggap sitologi impresi sebagai standar emas (meskipun tidak digunakan secara luas dalam praktik klinis).
Munculnya sel goblet pada kornea merupakan bukti langsung konjungtivalisasi dan menjadi dasar diagnosis. Filter diterapkan pada pusat kornea untuk memeriksa keberadaan sel goblet.
Berikut adalah akurasi prediksi sitologi impresi dalam diagnosis berbagai tumor.
| Penyakit | Akurasi Prediksi Diagnostik |
|---|---|
| Tumor epitel skuamosa permukaan okular (diagnosis histologis) | 80% |
| Displasia sedang | 77% |
| Keratitis akantamoeba | 94.6% |
Standar emas untuk diagnosis definitif tumor epitel permukaan okular adalah biopsi eksisi. Sitologi impresi dan sitologi eksfoliatif sulit membedakan lesi superfisial dan invasif, sehingga tidak digunakan untuk diagnosis definitif.
Pada tumor epitel permukaan okular dengan latar belakang konjungtivitis vernal kronis, sulit dibedakan dari hiperplasia pseudoepiteliomatosa. Jika sitologi impresi mendeteksi sel epitel berpigmen pleomorfik, hal ini menjadi petunjuk untuk mencurigai tumor epitel permukaan okular 1).
Akurasi prediksi diagnosis histologis adalah 80%, dan diagnosis definitif memerlukan biopsi eksisi. Karena sitologi impresi sulit membedakan lesi invasif dan intraepitelial, maka ia diposisikan sebagai alat diagnostik tambahan.
Filter selulosa asetat mengelupas lapisan teratas (1-3 lapisan) epitel permukaan okular bersama dengan sekresi mukus.
Jika filter menempel dengan kuat, dapat diperoleh lembaran sel berlapis-lapis. Hal ini memungkinkan evaluasi morfologi, distribusi, dan densitas sel secara dua dimensi.
Pada konjungtiva normal, sel goblet tersebar di seluruh konjungtiva. Peradangan kronis dan mata kering berat menghancurkan sel goblet dan menyebabkan metaplasia epitel (skuamosa). Pada defisiensi sel punca limbal, kekurangan sel punca limbal menyebabkan hilangnya fungsi regenerasi epitel kornea, sehingga konjungtiva menutupi permukaan kornea (“konjungtivalisasi”). Identifikasi sel goblet pada kornea melalui sitologi impresi merupakan bukti konjungtivalisasi ini.
Meskipun sitologi impresi bersifat invasif minimal, karena menyebabkan defek epitel di lokasi pengambilan, maka tidak dapat dikatakan sebagai pemeriksaan non-invasif sepenuhnya. Dalam beberapa tahun terakhir, modalitas baru berikut telah berkembang.
Karakteristik masing-masing modalitas diagnostik ditunjukkan di bawah ini.
| Modalitas | Karakteristik | Catatan |
|---|---|---|
| Sitologi impresi | Penilaian sel goblet dan imunohistokimia mungkin | Hanya menilai 1-3 lapisan, terdapat defek epitel |
| Mikroskop konfokal in vivo | Kuantifikasi sel dengan resolusi 1-10 μm | Memerlukan kerja sama pasien selama 5-15 menit |
| Tomografi koherensi optik resolusi tinggi | Membedakan lesi invasif dan intraepitelial | Ketebalan epitel >120 μm mengindikasikan invasi |
Mikroskop confocal in vivo memungkinkan pengamatan sel kornea dan konjungtiva secara in vivo dengan resolusi 1-10 μm. Kuantifikasi sel dimungkinkan, tetapi memerlukan kerja sama pasien selama 5-15 menit.
Optical coherence tomography resolusi tinggi (OCT segmen anterior resolusi tinggi) berguna untuk membedakan lesi invasif dan intraepitelial dengan mengidentifikasi penebalan epitel (>120 μm).
Untuk tumor epitel skuamosa permukaan okular, beberapa terapi obat seperti mitomycin C 0,04%, 5-fluorouracil, interferon α-2b, obat anti-VEGF, dan cidofovir telah diteliti, namun pedoman resmi belum ditetapkan.
Pada seorang pria berusia 24 tahun dengan tumor epitel skuamosa permukaan okular dengan latar belakang konjungtivitis vernal kronis, sitologi impresi mendeteksi sel epitel pleomorfik yang mengandung pigmen, dan pengecilan tumor dikonfirmasi setelah dua siklus terapi mitomycin C 0,04%. Temuan patologis dari biopsi eksisi selanjutnya (margin 4 mm, teknik no-touch, krioterapi, dan transplantasi membran amniotik) menunjukkan displasia ringan hingga sedang, dan tidak ada kekambuhan yang diamati selama 6 bulan1). Sitologi impresi juga dianggap dapat diterapkan untuk pemantauan pasca-terapi mitomycin C.
Mikroskop confocal in vivo dan optical coherence tomography resolusi tinggi adalah modalitas non-invasif yang berkembang. OCT resolusi tinggi berguna untuk membedakan lesi invasif dengan indikator penebalan epitel (>120 μm), namun keduanya masih mengandung elemen penelitian. Sitologi impresi tetap memiliki nilai unik dalam hal identifikasi sel goblet dan pewarnaan imunohistokimia.
