İmpresyon sitolojisi, selüloz asetat filtre kağıdının oküler yüzeye uygulanarak yüzeyel epitel hücrelerinin toplandığı ve histolojik, immünohistokimyasal ve moleküler biyolojik analizlerin yapıldığı düşük invaziv bir test yöntemidir.
1977’de Egbert ve ark. tarafından konjonktival goblet hücrelerini araştırmak amacıyla geliştirilmiş, daha sonra Tseng tarafından iyileştirilerek oküler yüzey hastalıklarında klinik kullanımı yaygınlaşmıştır.
Patolojik tanı, doku tanısı ve sitolojik tanı olarak ikiye ayrılır. Sitolojik tanı, doku yapısı hakkında bilgi vermediği için doku tanısının yardımcısı olarak kabul edilir, ancak gözde doku tanısının invazivliği nedeniyle sitolojik tanının kullanışlılığı yüksektir.
İmpresyon sitolojisinde epitel filtre kağıdıyla soyulur ve hücreler iki boyutlu bir tabaka halinde toplanır. Konjonktival smear ise pamuklu çubuk veya sitoloji spatülü ile kazınarak alınır. İmpresyon sitolojisi, goblet hücrelerinin dağılımı ve yoğunluğunun değerlendirilmesinde üstündür.
İmpresyon sitolojisi, “semptomları” inceleyen bir hastalık değil, bir inceleme yöntemidir; bu nedenle bu bölümde alınan örneklerde gözlenen bulgular ve bunların klinik önemi açıklanmaktadır.
İmpresyon sitolojisi aşağıdaki geniş hastalık ve durum yelpazesinde uygulanır.
Oküler yüzey hastalıkları
Tümörler
Oküler yüzey skuamöz epitelyal tümörleri, konjonktival intraepitelyal neoplazi (CIN) ve invaziv skuamöz hücreli karsinom olarak sınıflandırılır. Başlıca risk faktörleri şunlardır:
Filtre kağıdı türlerini karşılaştırın.
Selüloz asetat membran
0.22 μm gözenek çaplı Millipore filtre: En iyi olduğu düşünülen standart seçim.
Şekil: 5 mm’lik şeritler halinde kesilmiş (bir ucu kare, bir ucu konik). Yönlendirme için yüzey işaretlenir.
PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) kullanımı: 10 mm çapında dairesel filtre kullanın.
Nitroselüloz membran
Yamuk şeritler (yaklaşık 3×6 mm): Standart şekil.
Ön ve arka ayrımı gereklidir: Pürüzsüz yüzey ön taraftır. Arka yüz (pürüzlü) konjonktiva epiteline yapıştırılır.
İmmünohistokimya: Nitroselüloz membran uygundur.
Biopore membran
Korneal limbal kök hücre yetmezliği tanısında kullanım: Selüloz asetat ve nitroselüloz ile birlikte bir seçenektir.
Ortak özellik: 1 ila 3 kat yüzey epiteli toplanabilir.
Toplama bölgesinde epitel defekti oluşur ve eve döndükten sonra göz ağrısına neden olabilir. Hastaya önceden açıklama yapılmalı ve kornea koruyucu damla reçete edilmelidir.
Örnek alınan bölgede epitel defekti oluştuğu için hasta eve döndükten sonra göz ağrısı hissedebilir. Test öncesinde açıklama yapılmalı ve kornea koruyucu damla reçete edilmelidir. Çoğu durumda defekt birkaç gün içinde kendiliğinden iyileşir.
Çeşitli hastalıklara ait imprint sitoloji bulguları aşağıda gösterilmiştir.
Korneal limbus kök hücre yetmezliği tanısında, imprint sitolojinin altın standart olduğu düşünülmektedir (ancak klinikte yaygın olarak kullanılmamaktadır).
Korneada goblet hücrelerinin görülmesi, konjonktivalizasyonun doğrudan kanıtıdır ve tanı için temel oluşturur. Filtre kornea merkezine uygulanır ve goblet hücrelerinin varlığı kontrol edilir.
Çeşitli tümör tanılarında imprint sitolojinin öngörü doğruluğu aşağıda gösterilmiştir.
| Hastalık | Tanı Öngörü Doğruluğu |
|---|---|
| Oküler yüzey skuamöz neoplazisi (histolojik tanı) | %80 |
| Orta derecede displazi | %77 |
| Acanthamoeba keratiti | %94.6 |
Oküler yüzey skuamöz neoplazilerinin kesin tanısı için altın standart eksizyonel biyopsidir. İmpresyon sitolojisi ve eksfolyatif sitoloji, yüzeysel ve invaziv lezyonları ayırt etmekte zorluk çeker ve kesin tanı için kullanılmaz.
Kronik vernal katarakt zemininde gelişen oküler yüzey skuamöz neoplazilerinde, psödoepitelyomatöz hiperplaziden ayırt etmek zordur. İmpresyon sitolojisinde pleomorfik pigment içeren epitel hücreleri saptanırsa, bu oküler yüzey skuamöz neoplazisi şüphesi için bir ipucu olabilir 1).
Histolojik tanı tahmin doğruluğu %80’dir ve kesin tanı için eksizyonel biyopsi gereklidir. İmpresyon sitolojisi invaziv ve intraepitelyal lezyonları ayırt etmekte zorlandığından, yardımcı bir tanı aracı olarak kabul edilir.
Selüloz asetat filtre, oküler yüzey epitelinin en üst katmanlarını (1-3 katman) mukus salgılarıyla birlikte sıyırarak toplar.
Filtre iyi yapıştırıldığında, birkaç katmandan oluşan çok katlı bir hücre tabakası olarak toplanabilir. Bu, hücre morfolojisi, dağılımı ve yoğunluğunun iki boyutlu olarak değerlendirilmesine olanak tanır.
Normal konjonktivada goblet hücreleri tüm konjonktivaya dağılmıştır. Kronik inflamasyon veya şiddetli kuru göz, goblet hücrelerini tahrip eder ve epitelyal metaplaziye (skuamöz metaplazi) neden olur. Limbus kök hücre yetmezliğinde, limbal kök hücrelerin tükenmesi, kornea epitelini yenileme işlevini kaybettirir ve konjonktiva epiteli kornea yüzeyini kaplar (konjonktivalizasyon). İmpresyon sitolojisinde korneada goblet hücrelerinin saptanması, bu konjonktivalizasyonun kanıtıdır.
İmpresyon sitolojisi minimal invaziv olmasına rağmen, örnekleme bölgesinde epitelyal defekt oluşturduğu için tamamen non-invaziv bir test değildir. Son yıllarda aşağıdaki yeni yöntemler gelişmektedir.
Her bir tanı yönteminin özellikleri aşağıda gösterilmiştir.
| Yöntem | Özellik | Açıklama |
|---|---|---|
| İmpresyon sitolojisi | Goblet hücresi ve immünohistokimyasal değerlendirme mümkün | Sadece 1-3 katman değerlendirilir, epitelyal defekt mevcut |
| In vivo konfokal mikroskopi | 1-10 µm çözünürlükte hücre kantifikasyonu | 5-15 dakika hasta işbirliği gerektirir |
| Yüksek çözünürlüklü optik koherens tomografi | İnvaziv ve intraepitelyal lezyonların ayrımı | Epitel kalınlığı >120 µm invazyonu düşündürür |
Canlı konfokal mikroskopi, kornea ve konjonktiva hücrelerini in vivo olarak 1-10 μm çözünürlükte gözlemlemeyi sağlar. Hücrelerin sayısallaştırılması mümkündür ancak 5-15 dakika hasta işbirliği gerektirir.
Yüksek çözünürlüklü optik koherens tomografi (yüksek çözünürlüklü ön segment optik koherens tomografi), epitel kalınlaşmasının (120 μm’yi aşan) tanımlanmasıyla invaziv ve intraepitelyal lezyonların ayrımında yararlıdır.
Oküler yüzey skuamöz neoplazisi için mitomisin C %0.04, 5-florourasil, interferon alfa-2b, anti-VEGF ilaçlar ve sidofovir gibi çeşitli ilaç tedavileri araştırılmıştır, ancak resmi kılavuzlar henüz oluşturulmamıştır.
Kronik bahar katarı zemininde 24 yaşında bir erkekte oküler yüzey skuamöz neoplazisinde, imprint sitolojide polimorfik pigment içeren epitel hücreleri saptanmış ve mitomisin C %0.04’ün iki kür tedavisi sonrası tümör küçülmesi doğrulanmıştır. Ardından yapılan eksizyonel biyopsi (4 mm sınır, temassız yöntem, kriyoterapi ve amniyon membran grefti dahil) hafif-orta dereceli displazi göstermiş ve 6 aylık takipte nüks gözlenmemiştir 1). İmprint sitolojinin mitomisin C tedavisi sonrası izlemde de kullanılabileceği belirtilmektedir.
Canlı konfokal mikroskopi ve yüksek çözünürlüklü optik koherens tomografi gelişmekte olan non-invaziv yöntemlerdir. Yüksek çözünürlüklü optik koherens tomografi, epitel kalınlığını (>120 μm) invaziv lezyonların ayrımında bir gösterge olarak kullanmada yararlıdır, ancak her ikisi de araştırma aşaması unsurları içerir. İmprint sitoloji, goblet hücrelerinin tanımlanması ve immünohistokimyasal boyama yapabilmesi açısından hala benzersiz bir değere sahiptir.
