การตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับ (impression cytology) เป็นการตรวจที่รุกรานน้อย โดยใช้กระดาษกรองเซลลูโลสอะซิเตตประทับบนผิวตาเพื่อเก็บเซลล์เยื่อบุผิวชั้นผิว แล้วนำไปวิเคราะห์ทางจุลพยาธิวิทยา อิมมูโนฮิสโตเคมี และอณูชีววิทยา
ในปี 1977 Egbert และคณะได้พัฒนาเทคนิคนี้เพื่อการศึกษาเซลล์ก๊อบเล็ตของเยื่อบุตา ต่อมา Tseng ได้ปรับปรุงให้ดีขึ้น ทำให้การประยุกต์ใช้ทางคลินิกสำหรับโรคผิวตาแพร่หลายมากขึ้น
การวินิจฉัยทางพยาธิวิทยาแบ่งออกเป็นการวินิจฉัยเนื้อเยื่อและการวินิจฉัยเซลล์ การวินิจฉัยเซลล์ถือเป็นการตรวจเสริมเนื่องจากการวินิจฉัยเนื้อเยื่อไม่ให้ข้อมูลโครงสร้างเนื้อเยื่อ แต่ในตา เนื่องจากการวินิจฉัยเนื้อเยื่อมีความรุกรานสูง การวินิจฉัยเซลล์จึงมีประโยชน์มาก
ในการตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับ เยื่อบุผิวจะถูกดึงออกด้วยกระดาษกรองและเก็บเซลล์เป็นแผ่นสองมิติ ส่วนการป้ายเยื่อบุตาใช้สำลีหรือไม้พายเซลล์วิทยาขูด เซลล์วิทยาแบบประทับดีกว่าในการประเมินการกระจายและความหนาแน่นของเซลล์ก๊อบเล็ต
เนื่องจากเซลล์วิทยาแบบประทับเป็นวิธีการตรวจ ไม่ใช่โรคที่วินิจฉัยจากอาการ ส่วนนี้จึงอธิบายสิ่งที่พบในตัวอย่างและความสำคัญทางคลินิก
เซลล์วิทยาแบบประทับใช้กับโรคและภาวะต่างๆ มากมายดังต่อไปนี้
โรคผิวตา
เนื้องอก
เนื้องอกผิวเยื่อบุผิวสความัสของพื้นผิวตาแบ่งออกเป็นเนื้องอกภายในเยื่อบุเยื่อบุตา (CIN) และมะเร็งเซลล์สความัสชนิดลุกลาม ปัจจัยเสี่ยงหลักมีดังนี้:
เปรียบเทียบชนิดของกระดาษกรอง
เมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตต
ตัวกรอง Millipore ขนาดรูพรุน 0.22 ไมโครเมตร: ตัวเลือกมาตรฐานที่ดีที่สุด
รูปร่าง: ตัดเป็นแถบขนาด 5 มม. (ปลายด้านหนึ่งเป็นสี่เหลี่ยม ปลายด้านหนึ่งเรียว) ทำเครื่องหมายบนพื้นผิวเพื่อบอกทิศทาง
สำหรับการใช้งาน PCR (ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส): ใช้ตัวกรองทรงกลมเส้นผ่านศูนย์กลาง 10 มม.
เมมเบรนไนโตรเซลลูโลส
รูปร่างสี่เหลี่ยมคางหมู (ประมาณ 3×6 มม.): รูปร่างมาตรฐาน
ต้องแยกด้านหน้าและด้านหลัง: ด้านเรียบคือด้านหน้า ด้านหลัง (หยาบ) ให้ติดกับเยื่อบุตา
อิมมูโนฮิสโตเคมี: เมมเบรนไนโตรเซลลูโลสเหมาะสม
เมมเบรน Biopore
การประยุกต์ใช้ในการวินิจฉัยโรคเซลล์ต้นกำเนิดลิมบัสกระจกตาพร่อง: เป็นตัวเลือกร่วมกับเซลลูโลสอะซิเตตและไนโตรเซลลูโลส
ลักษณะร่วม: สามารถเก็บเยื่อบุผิวชั้นผิวได้ 1-3 ชั้น
บริเวณที่เก็บจะเป็นรอยขาดของเยื่อบุผิว และอาจทำให้เกิดอาการปวดตาเมื่อกลับบ้าน อธิบายให้ผู้ป่วยทราบล่วงหน้าและสั่งจ่ายยาหยอดตาป้องกันกระจกตา
เนื่องจากเกิดข้อบกพร่องของเยื่อบุผิวบริเวณที่เก็บตัวอย่าง ผู้ป่วยอาจรู้สึกปวดตาเมื่อกลับบ้าน ควรอธิบายก่อนการตรวจ และจ่ายยาหยอดตาป้องกันกระจกตาเพื่อจัดการ ในกรณีส่วนใหญ่ ข้อบกพร่องจะหายได้เองภายในไม่กี่วัน
ผลการตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับสำหรับโรคผิวตาต่างๆ มีดังนี้
ในการวินิจฉัยภาวะพร่องสเต็มเซลล์บริเวณลิมบัสของกระจกตา มีความเห็นว่าการตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับเป็นมาตรฐานทองคำ (แม้ว่าจะไม่ได้ใช้กันอย่างแพร่หลายในทางคลินิก)
การปรากฏของเซลล์กอบเล็ตบนกระจกตาเป็นหลักฐานโดยตรงของการเปลี่ยนเป็นเยื่อบุตา (conjunctivalization) และเป็นพื้นฐานในการวินิจฉัย ใช้ฟิลเตอร์ที่บริเวณกลางกระจกตาเพื่อตรวจสอบการมีอยู่ของเซลล์กอบเล็ต
ความแม่นยำในการทำนายของการตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับในการวินิจฉัยเนื้องอกต่างๆ มีดังนี้
| โรค | ความแม่นยำในการทำนายการวินิจฉัย |
|---|---|
| เนื้องอกเยื่อบุผิวสความัสผิวตา (การวินิจฉัยทางจุลกายวิภาคศาสตร์) | 80% |
| dysplasia ระดับปานกลาง | 77% |
| โรคกระจกตาอักเสบจากอะแคนทามีบา | 94.6% |
มาตรฐานทองคำสำหรับการวินิจฉัยที่แน่ชัดของเนื้องอกเยื่อบุผิวผิวตาคือการตัดชิ้นเนื้อออก การตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับและการขูดเซลล์ยากที่จะแยกแยะรอยโรคที่ผิวและรุกล้ำ จึงไม่ใช้สำหรับการวินิจฉัยที่แน่ชัด
ในเนื้องอกเยื่อบุผิวผิวตาที่มีพื้นหลังเป็นเยื่อบุตาอักเสบจากภูมิแพ้ตามฤดูกาลเรื้อรัง การแยกจากภาวะเยื่อบุผิวหนาตัวเทียมทำได้ยาก หากการตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับพบเซลล์เยื่อบุผิวที่มีเม็ดสีหลายรูปร่าง นี่เป็นจุดเริ่มต้นที่ทำให้สงสัยเนื้องอกเยื่อบุผิวผิวตา 1)
ความแม่นยำในการทำนายการวินิจฉัยทางเนื้อเยื่อวิทยาคือ 80% และการวินิจฉัยที่แน่ชัดจำเป็นต้องตัดชิ้นเนื้อออก เนื่องจากการตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับยากที่จะแยกแยะรอยโรครุกล้ำและรอยโรคในเยื่อบุผิว จึงถูกจัดเป็นเครื่องมือวินิจฉัยเสริม
แผ่นกรองเซลลูโลสอะซิเตตจะลอกชั้นผิวตื้นที่สุด (1-3 ชั้น) ของเยื่อบุผิวผิวตาพร้อมกับสารคัดหลั่งเมือก
เมื่อแผ่นกรองยึดติดแน่น จะสามารถเก็บเป็นแผ่นเซลล์ที่ซ้อนกันหลายชั้นได้ ทำให้สามารถประเมินรูปร่าง การกระจาย และความหนาแน่นของเซลล์ในสองมิติ
บนเยื่อบุตาปกติ เซลล์กอบเล็ตกระจายทั่วเยื่อบุตา การอักเสบเรื้อรังและตาแห้งรุนแรงทำลายเซลล์กอบเล็ตและทำให้เกิดเมตาเพลเซียของเยื่อบุผิว (สความัส) ในภาวะพร่องสเต็มเซลล์ลิมบัส การขาดสเต็มเซลล์ลิมบัสทำให้สูญเสียหน้าที่ในการเติมเต็มเยื่อบุผิวกระจกตา ส่งผลให้เยื่อบุตาปกคลุมผิวกระจกตา (“เยื่อบุตาคลุม”) การตรวจพบเซลล์กอบเล็ตบนกระจกตาโดยการตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับเป็นหลักฐานของการคลุมนี้
แม้ว่าการตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับจะมีการรุกรานน้อย แต่ก็ทำให้เกิดข้อบกพร่องของเยื่อบุผิวบริเวณที่เก็บตัวอย่าง ดังนั้นจึงไม่ถือเป็นการตรวจแบบไม่รุกรานโดยสมบูรณ์ ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา วิธีการใหม่ต่อไปนี้ได้พัฒนาขึ้น
ลักษณะของแต่ละวิธีการวินิจฉัยแสดงไว้ด้านล่าง
| วิธีการ | ลักษณะ | หมายเหตุ |
|---|---|---|
| การตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับ | สามารถประเมินเซลล์กุณโฑและอิมมูโนฮิสโตเคมีได้ | ประเมินเพียง 1-3 ชั้น มีข้อบกพร่องของเยื่อบุผิว |
| กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลในร่างกาย | การหาปริมาณเซลล์ด้วยความละเอียด 1-10 ไมโครเมตร | ต้องให้ผู้ป่วยให้ความร่วมมือ 5-15 นาที |
| เครื่องตรวจการเชื่อมโยงกันของแสงความละเอียดสูง | แยกแยะรอยโรคที่ลุกลามและในเยื่อบุผิว | ความหนาของเยื่อบุผิว >120 ไมโครเมตร บ่งชี้การลุกลาม |
กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลในร่างกายช่วยให้สังเกตเซลล์กระจกตาและเยื่อบุตาในร่างกายด้วยความละเอียด 1-10 ไมโครเมตร สามารถวัดปริมาณเซลล์ได้ แต่ต้องอาศัยความร่วมมือจากผู้ป่วย 5-15 นาที
เครื่องตรวจการเชื่อมโยงกันของแสงความละเอียดสูง (OCT ส่วนหน้าความละเอียดสูง) มีประโยชน์ในการแยกแยะรอยโรคที่ลุกลามและในเยื่อบุผิวโดยการระบุความหนาของเยื่อบุผิว (>120 ไมโครเมตร)
สำหรับเนื้องอกเยื่อบุผิวสความัสของผิวตา มีการศึกษาการรักษาด้วยยาหลายชนิด เช่น ไมโตมัยซิน C 0.04%, 5-ฟลูออโรยูราซิล, อินเตอร์เฟอรอน α-2b, ยาต้าน VEGF และซิโดโฟเวียร์ แต่ยังไม่มีแนวทางปฏิบัติอย่างเป็นทางการ
ในชายอายุ 24 ปีที่มีเนื้องอกเยื่อบุผิวสความัสของผิวตาบนพื้นหลังของเยื่อบุตาอักเสบจากภูมิแพ้เรื้อรัง การตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับตราตรวจพบเซลล์เยื่อบุผิวที่มีรูปร่างหลากหลายซึ่งมีเม็ดสี และพบว่าก้อนเนื้องอกหดตัวลงหลังจากรักษาด้วยไมโตมัยซิน C 0.04% สองรอบ ผลทางพยาธิวิทยาจากการตัดชิ้นเนื้อเพื่อนำออก (ขอบ 4 มม., เทคนิคไม่สัมผัส, การจี้เย็น, และการปลูกถ่ายเยื่อหุ้มน้ำคร่ำ) แสดงภาวะเยื่อบุผิวผิดปกติระดับเล็กน้อยถึงปานกลาง และไม่พบการกลับเป็นซ้ำในระยะเวลา 6 เดือน1) การตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับตรายังถือว่าสามารถนำมาใช้ในการติดตามผลหลังการรักษาด้วยไมโตมัยซิน C ได้
กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลในร่างกายและเครื่องตรวจการเชื่อมโยงกันของแสงความละเอียดสูงเป็นวิธีการที่ไม่รุกรานที่กำลังพัฒนา OCT ความละเอียดสูงมีประโยชน์ในการแยกแยะรอยโรคลุกลามโดยใช้ความหนาของเยื่อบุผิว (>120 ไมโครเมตร) เป็นตัวบ่งชี้ แต่ทั้งสองยังมีองค์ประกอบของการวิจัย การตรวจเซลล์วิทยาแบบประทับตรายังคงมีคุณค่าเฉพาะตัวในด้านการระบุเซลล์กุณโฑและการย้อมอิมมูโนฮิสโตเคมี
