इंप्रेशन साइटोलॉजी एक न्यूनतम आक्रामक परीक्षण है जिसमें एसीटेट सेल्यूलोज फिल्टर पेपर को नेत्र सतह पर लगाकर सतही उपकला कोशिकाएं एकत्र की जाती हैं, और हिस्टोलॉजिकल, इम्यूनोहिस्टोकेमिकल और आणविक जैविक विश्लेषण किए जाते हैं।
1977 में एगबर्ट एट अल. ने कंजंक्टिवल गॉब्लेट कोशिकाओं के अध्ययन के लिए तकनीक स्थापित की, बाद में त्सेंग ने इसमें सुधार किया और नेत्र सतह रोगों में नैदानिक अनुप्रयोग का विस्तार हुआ।
पैथोलॉजिकल निदान को हिस्टोलॉजी और साइटोलॉजी में विभाजित किया जाता है। साइटोलॉजी ऊतक संरचना की जानकारी नहीं देती, इसलिए इसे हिस्टोलॉजी का सहायक परीक्षण माना जाता है, लेकिन आंख में हिस्टोलॉजी की आक्रामकता अधिक होने के कारण साइटोलॉजी की उपयोगिता अधिक है।
इंप्रेशन साइटोलॉजी में फिल्टर पेपर से उपकला को छीलकर कोशिकाओं को द्वि-आयामी शीट के रूप में एकत्र किया जाता है। कंजंक्टिवल स्मीयर में रुई के फाहे या साइटोलॉजी स्पैटुला से खुरच कर एकत्र किया जाता है। इंप्रेशन साइटोलॉजी गॉब्लेट कोशिकाओं के वितरण और घनत्व के मूल्यांकन में बेहतर है।
इम्प्रेशन साइटोलॉजी एक जांच विधि है, न कि कोई रोग जिसके ‘लक्षण’ हों, इसलिए इस खंड में नमूनों में देखे जाने वाले निष्कर्षों और उनके नैदानिक महत्व का वर्णन किया गया है।
इम्प्रेशन साइटोलॉजी निम्नलिखित व्यापक रोगों और स्थितियों पर लागू होती है।
नेत्र सतह के रोग
ट्यूमर
नेत्र सतह स्क्वैमस एपिथेलियल ट्यूमर को कंजंक्टिवल इंट्राएपिथेलियल नियोप्लासिया (CIN) और आक्रामक स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा में वर्गीकृत किया जाता है। प्रमुख जोखिम कारक इस प्रकार हैं:
फिल्टर पेपर के प्रकारों की तुलना करें।
सेल्यूलोज एसीटेट झिल्ली
0.22 μm छिद्र वाला मिलिपोर फिल्टर: सबसे अच्छा माना जाने वाला मानक विकल्प।
आकार: 5 मिमी की पट्टियों में काटा गया (एक सिरा चौकोर, एक सिरा पतला)। अभिविन्यास के लिए सतह पर निशान लगाएं।
PCR उपयोग: 10 मिमी व्यास के गोलाकार फिल्टर का उपयोग करें।
नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली
समलंब पट्टी (लगभग 3×6 मिमी): मानक आकार।
आगे-पीछे का अंतर आवश्यक: चिकनी सतह ऊपर की ओर होती है। पिछली (खुरदरी) सतह को कंजंक्टिवल एपिथेलियम से चिपकाएं।
इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री: नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली उपयुक्त है।
बायोपोर झिल्ली
लिंबल स्टेम सेल कमी के निदान में अनुप्रयोग: सेल्यूलोज एसीटेट और नाइट्रोसेल्यूलोज के साथ एक विकल्प।
सामान्य विशेषताएं: 1 से 3 परतों की सतही एपिथेलियम एकत्र कर सकते हैं।
नमूना लेने वाला क्षेत्र उपकला दोष बन जाता है, जिससे घर लौटने पर आंख में दर्द हो सकता है। रोगी को पहले से समझाएं और कॉर्नियल सुरक्षात्मक बूंदें लिखें।
नमूना लेने वाली जगह पर उपकला दोष हो सकता है, जिससे घर लौटने पर आंख में दर्द हो सकता है। जांच से पहले समझाएं और कॉर्नियल सुरक्षात्मक बूंदें लिखकर दें। अधिकांश मामलों में, दोष कुछ दिनों में स्वतः ठीक हो जाता है।
प्रत्येक रोग के लिए इंप्रेशन साइटोलॉजी निष्कर्ष नीचे दिए गए हैं।
कॉर्नियल लिंबल स्टेम सेल कमी के निदान में, कुछ विशेषज्ञ इंप्रेशन साइटोलॉजी को स्वर्ण मानक मानते हैं (हालांकि यह नैदानिक रूप से व्यापक रूप से उपयोग नहीं किया जाता है)।
कॉर्निया पर गॉब्लेट कोशिकाओं का दिखना कंजंक्टिवलाइजेशन का प्रत्यक्ष प्रमाण है और निदान का आधार है। कॉर्निया के केंद्र पर फिल्टर लगाकर गॉब्लेट कोशिकाओं की उपस्थिति की जांच करें।
प्रत्येक ट्यूमर निदान में इंप्रेशन साइटोलॉजी की पूर्वानुमान सटीकता नीचे दी गई है।
| रोग | नैदानिक पूर्वानुमान सटीकता |
|---|---|
| नेत्र सतह स्क्वैमस उपकला ट्यूमर (हिस्टोलॉजिकल निदान) | 80% |
| मध्यम डिसप्लेसिया | 77% |
| एकैन्थअमीबा केराटाइटिस | 94.6% |
नेत्र सतह स्क्वैमस सेल ट्यूमर के निश्चित निदान के लिए स्वर्ण मानक एक्सिशनल बायोप्सी है। इम्प्रेशन साइटोलॉजी और एक्सफोलिएटिव साइटोलॉजी सतही और आक्रामक घावों के बीच अंतर करने में कठिनाई होती है, इसलिए इनका उपयोग निश्चित निदान के लिए नहीं किया जाता है।
क्रोनिक वर्नल कैटर की पृष्ठभूमि पर नेत्र सतह स्क्वैमस सेल ट्यूमर में, स्यूडोएपिथेलियोमेटस हाइपरप्लासिया से अंतर करना मुश्किल है। यदि इम्प्रेशन साइटोलॉजी में बहुरूपी वर्णक युक्त उपकला कोशिकाएं पाई जाती हैं, तो यह नेत्र सतह स्क्वैमस सेल ट्यूमर का संदेह पैदा करने वाला संकेत हो सकता है1)।
हिस्टोलॉजिकल निदान की पूर्वानुमान सटीकता 80% है, और निश्चित निदान के लिए एक्सिशनल बायोप्सी आवश्यक है। इम्प्रेशन साइटोलॉजी आक्रामक और इंट्राएपिथेलियल घावों के बीच अंतर करने में कठिनाई के कारण इसे एक सहायक निदान उपकरण के रूप में माना जाता है।
सेल्यूलोज एसीटेट फिल्टर नेत्र सतह उपकला की सबसे ऊपरी परत (1-3 परतें) को श्लेष्म स्राव के साथ खींचकर निकालता है।
जब फिल्टर को अच्छी तरह से चिपकाया जाता है, तो इसे कई परतों की एक स्तरीकृत कोशिका शीट के रूप में निकाला जा सकता है। इससे कोशिकाओं की आकृति, वितरण और घनत्व का द्वि-आयामी मूल्यांकन संभव होता है।
सामान्य कंजंक्टिवा पर, गॉब्लेट कोशिकाएं पूरे कंजंक्टिवा में वितरित होती हैं। पुरानी सूजन और गंभीर ड्राई आई गॉब्लेट कोशिकाओं को नष्ट कर देते हैं और उपकला मेटाप्लासिया (स्क्वैमस मेटाप्लासिया) का कारण बनते हैं। लिंबल स्टेम सेल की कमी में, लिंबस की स्टेम कोशिकाओं की कमी के कारण कॉर्नियल उपकला को पुनः भरने की क्षमता खत्म हो जाती है, और कंजंक्टिवल उपकला कॉर्नियल सतह को ढक लेती है (कंजंक्टिवलाइजेशन)। इम्प्रेशन साइटोलॉजी द्वारा कॉर्निया पर गॉब्लेट कोशिकाओं की पहचान इस कंजंक्टिवलाइजेशन का प्रमाण है।
हालांकि इंप्रेशन साइटोलॉजी न्यूनतम आक्रामक है, यह नमूना स्थल पर उपकला दोष उत्पन्न करती है, इसलिए यह पूरी तरह से गैर-आक्रामक परीक्षण नहीं है। हाल के वर्षों में, निम्नलिखित नई पद्धतियाँ विकसित हुई हैं।
प्रत्येक निदान पद्धति की विशेषताएँ नीचे दी गई हैं।
| पद्धति | विशेषताएँ | टिप्पणी |
|---|---|---|
| इंप्रेशन साइटोलॉजी | गॉब्लेट कोशिकाओं और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री का मूल्यांकन संभव | केवल 1-3 परतों का मूल्यांकन, उपकला दोष मौजूद |
| इन विवो कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी | 1-10 μm रिज़ॉल्यूशन पर कोशिका मात्रा निर्धारण | 5-15 मिनट के रोगी सहयोग की आवश्यकता |
| उच्च-रिज़ॉल्यूशन ऑप्टिकल कोहेरेंस टोमोग्राफी | आक्रामक और इंट्राएपिथेलियल घावों के बीच अंतर | उपकला मोटाई >120 μm आक्रामकता का सुझाव देती है |
जीवित कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी कॉर्निया और कंजंक्टिवा की कोशिकाओं को 1-10 μm के रिज़ॉल्यूशन पर देखने में सक्षम बनाती है। यह कोशिकाओं की मात्रा निर्धारित कर सकती है, लेकिन रोगी के 5-15 मिनट के सहयोग की आवश्यकता होती है।
उच्च-रिज़ॉल्यूशन ऑप्टिकल कोहेरेंस टोमोग्राफी (हाई-रिज़ॉल्यूशन पूर्वकाल खंड ऑप्टिकल कोहेरेंस टोमोग्राफी) उपकला मोटाई (120 μm से अधिक) की पहचान करके आक्रामक और इंट्राएपिथेलियल घावों के बीच अंतर करने में उपयोगी मानी जाती है।
नेत्र सतह स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा के लिए माइटोमाइसिन C 0.04%, 5-फ्लूरोरासिल, इंटरफेरॉन अल्फा-2b, एंटी-VEGF दवाएं और सिडोफोविर सहित कई दवा उपचारों का अध्ययन किया गया है, लेकिन अभी तक कोई आधिकारिक दिशानिर्देश स्थापित नहीं हुआ है।
क्रोनिक वर्नल कंजक्टिवाइटिस की पृष्ठभूमि वाले 24 वर्षीय पुरुष में नेत्र सतह स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा में, इंप्रेशन साइटोलॉजी ने बहुरूपी वर्णक-युक्त उपकला कोशिकाओं का पता लगाया। माइटोमाइसिन C 0.04% के दो चक्रों के बाद ट्यूमर में कमी देखी गई। बाद में की गई एक्सिशनल बायोप्सी (4 मिमी मार्जिन, नो-टच तकनीक, क्रायोथेरेपी और एमनियोटिक झिल्ली ग्राफ्ट सहित) की पैथोलॉजी ने हल्के से मध्यम डिसप्लेसिया दिखाया, और 6 महीने के अनुवर्तन में कोई पुनरावृत्ति नहीं पाई गई1)। इंप्रेशन साइटोलॉजी को माइटोमाइसिन C उपचार के बाद निगरानी के लिए भी लागू किया जा सकता है।
जीवित कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी और उच्च-रिज़ॉल्यूशन ऑप्टिकल कोहेरेंस टोमोग्राफी विकसित हो रही गैर-आक्रामक विधियाँ हैं। उच्च-रिज़ॉल्यूशन ऑप्टिकल कोहेरेंस टोमोग्राफी उपकला मोटाई (>120 μm) को संकेतक के रूप में उपयोग करके आक्रामक घावों के भेदभाव में उपयोगी है, लेकिन दोनों में अनुसंधान चरण के तत्व शामिल हैं। इंप्रेशन साइटोलॉजी गॉब्लेट कोशिकाओं की पहचान और इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधलापन की क्षमता के कारण अपना विशिष्ट मूल्य बनाए रखती है।
