A citologia de impressão é um exame minimamente invasivo que aplica papel-filtro de acetato de celulose na superfície ocular para coletar células epiteliais superficiais, realizando análises histológicas, imuno-histoquímicas e moleculares.
Em 1977, Egbert et al. estabeleceram a técnica para pesquisa de células caliciformes conjuntivais, posteriormente aprimorada por Tseng, ampliando sua aplicação clínica para doenças da superfície ocular.
O diagnóstico patológico divide-se em diagnóstico tecidual e citológico. A citologia é considerada um exame auxiliar ao diagnóstico tecidual por não fornecer informações sobre a estrutura do tecido, mas no olho, devido à alta invasividade do diagnóstico tecidual, a citologia tem grande utilidade.
Na citologia de impressão, o epitélio é destacado com papel-filtro e as células são coletadas como uma lâmina bidimensional. No esfregaço conjuntival, a raspagem é feita com cotonete ou espátula citológica. A citologia de impressão é superior na avaliação da distribuição e densidade das células caliciformes.
Como a citologia de impressão é um método de exame e não uma doença diagnosticada com base nos sintomas, esta seção descreve os achados observados nas amostras e seu significado clínico.
A citologia de impressão é aplicada a uma ampla gama de doenças e condições a seguir.
Doenças da superfície ocular
Tumores
Os tumores de superfície ocular de células escamosas são classificados em neoplasia intraepitelial conjuntival (CIN) e carcinoma espinocelular invasivo. Os principais fatores de risco são os seguintes:
Comparar os tipos de papel filtro.
Membrana de acetato de celulose
Filtro Millipore com poros de 0,22 μm: A escolha padrão considerada a melhor.
Formato: Cortado em tiras de 5 mm (uma extremidade quadrada, uma extremidade afunilada). Marcar a superfície para orientação.
Para aplicações de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase): Usar filtro circular de 10 mm de diâmetro.
Membrana de nitrocelulose
Formato trapezoidal (aproximadamente 3×6 mm): Formato padrão.
É necessário distinguir frente e verso: O lado liso é a frente. O verso (áspero) deve aderir ao epitélio conjuntival.
Imuno-histoquímica: A membrana de nitrocelulose é adequada.
Membrana Biopore
Aplicação no diagnóstico de deficiência de células-tronco do limbo corneano: Opção junto com acetato de celulose e nitrocelulose.
Características comuns: Pode coletar 1-3 camadas de epitélio superficial.
O local da coleta se torna um defeito epitelial, podendo causar dor ocular após o retorno para casa. Explique ao paciente com antecedência e prescreva colírios protetores da córnea.
Como ocorre um defeito epitelial no local da coleta, o paciente pode sentir dor ocular ao voltar para casa. Isso deve ser explicado antes do exame, e colírios protetores da córnea são prescritos para lidar com a situação. Na maioria dos casos, o defeito cicatriza espontaneamente em poucos dias.
Abaixo estão os achados da citologia de impressão para várias doenças da superfície ocular.
No diagnóstico da deficiência de células-tronco do limbo corneano, alguns consideram a citologia de impressão como padrão-ouro (embora não seja amplamente utilizada na prática clínica).
O aparecimento de células caliciformes na córnea é evidência direta de conjuntivalização e serve como base para o diagnóstico. O filtro é aplicado no centro da córnea para verificar a presença de células caliciformes.
Abaixo está a precisão preditiva da citologia de impressão no diagnóstico de vários tumores.
| Doença | Precisão Preditiva Diagnóstica |
|---|---|
| Tumor epitelial escamoso da superfície ocular (diagnóstico histológico) | 80% |
| Displasia moderada | 77% |
| Ceratite por Acanthamoeba | 94.6% |
O padrão ouro para o diagnóstico definitivo do tumor epitelial da superfície ocular é a biópsia excisional. A citologia de impressão e a citologia esfoliativa têm dificuldade em distinguir lesões superficiais e invasivas, não sendo utilizadas para diagnóstico definitivo.
Em tumores epiteliais da superfície ocular com histórico de ceratoconjuntivite primaveril crônica, é difícil diferenciar de hiperplasia pseudoepiteliomatosa. Se a citologia de impressão detectar células epiteliais pigmentadas pleomórficas, isso é um indício para suspeitar de tumor epitelial da superfície ocular 1).
A precisão preditiva do diagnóstico histológico é de 80%, e o diagnóstico definitivo requer biópsia excisional. Como a citologia de impressão tem dificuldade em distinguir lesões invasivas de intraepiteliais, ela é posicionada como uma ferramenta diagnóstica auxiliar.
O filtro de acetato de celulose remove as camadas mais superficiais (1 a 3 camadas) do epitélio da superfície ocular juntamente com as secreções mucosas.
Quando o filtro adere firmemente, é possível obter uma lâmina celular estratificada com várias camadas. Isso permite a avaliação bidimensional da morfologia, distribuição e densidade celular.
Na conjuntiva normal, as células caliciformes estão distribuídas por toda a conjuntiva. A inflamação crônica e o olho seco grave destroem as células caliciformes e causam metaplasia epitelial (escamosa). Na deficiência de células-tronco do limbo, a depleção das células-tronco do limbo leva à perda da função de reposição do epitélio corneano, resultando na cobertura da superfície da córnea pela conjuntiva (“conjuntivalização”). A identificação de células caliciformes na córnea por citologia de impressão é evidência dessa conjuntivalização.
Embora a citologia por impressão seja minimamente invasiva, ela causa um defeito epitelial no local da coleta, portanto não pode ser considerada um exame completamente não invasivo. Nos últimos anos, as seguintes novas modalidades têm se desenvolvido.
As características de cada modalidade diagnóstica são mostradas abaixo.
| Modalidade | Características | Observações |
|---|---|---|
| Citologia por impressão | Avaliação de células caliciformes e imuno-histoquímica possível | Avalia apenas 1-3 camadas, com defeito epitelial |
| Microscopia confocal in vivo | Quantificação celular com resolução de 1-10 μm | Requer cooperação do paciente por 5-15 minutos |
| Tomografia de coerência óptica de alta resolução | Diferenciação entre lesões invasivas e intraepiteliais | Espessura epitelial >120 μm sugere invasão |
O microscópio confocal in vivo permite a observação de células da córnea e conjuntiva in vivo com resolução de 1 a 10 μm. A quantificação celular é possível, mas requer cooperação do paciente por 5 a 15 minutos.
A tomografia de coerência óptica de alta resolução (OCT de segmento anterior de alta resolução) é útil para distinguir lesões invasivas de intraepiteliais, identificando espessamento epitelial (>120 μm).
Para tumores epiteliais escamosos da superfície ocular, várias terapias medicamentosas, como mitomicina C 0,04%, 5-fluorouracil, interferon α-2b, anti-VEGF e cidofovir, foram estudadas, mas as diretrizes oficiais ainda não foram estabelecidas.
Em um homem de 24 anos com tumor epitelial escamoso da superfície ocular em contexto de ceratoconjuntivite primaveril crônica, a citologia de impressão detectou células epiteliais pleomórficas contendo pigmento, e a redução do tumor foi confirmada após dois ciclos de mitomicina C 0,04%. Os achados patológicos da biópsia excisional subsequente (margem de 4 mm, técnica no-touch, crioterapia e transplante de membrana amniótica) mostraram displasia leve a moderada, e nenhuma recorrência foi observada em 6 meses1). A citologia de impressão também é considerada aplicável para monitoramento pós-tratamento com mitomicina C.
O microscópio confocal in vivo e a tomografia de coerência óptica de alta resolução são modalidades não invasivas em desenvolvimento. A OCT de alta resolução é útil para distinguir lesões invasivas usando espessamento epitelial (>120 μm) como indicador, mas ambas ainda contêm elementos de pesquisa. A citologia de impressão mantém seu valor único na identificação de células caliciformes e coloração imuno-histoquímica.
