Tế bào học ấn bản (impression cytology) là một xét nghiệm xâm lấn tối thiểu, áp giấy lọc cellulose acetate lên bề mặt mắt để thu thập các tế bào biểu mô bề mặt, sau đó tiến hành phân tích mô học, hóa mô miễn dịch và sinh học phân tử.
Năm 1977, Egbert và cộng sự đã phát triển kỹ thuật này để nghiên cứu tế bào đài kết mạc, sau đó Tseng cải tiến, mở rộng ứng dụng lâm sàng cho các bệnh bề mặt mắt.
Chẩn đoán bệnh lý được chia thành chẩn đoán mô học và tế bào học. Tế bào học được coi là xét nghiệm bổ trợ cho chẩn đoán mô học vì không cung cấp thông tin về cấu trúc mô, nhưng ở mắt, do chẩn đoán mô học xâm lấn nhiều, tế bào học có tính hữu dụng cao.
Trong tế bào học ấn bản, biểu mô được bóc tách bằng giấy lọc và các tế bào được thu thập dưới dạng một lớp hai chiều. Trong phết kết mạc, cạo bằng tăm bông hoặc thìa tế bào học. Tế bào học ấn bản ưu việt trong đánh giá sự phân bố và mật độ tế bào đài.
Vì tế bào học dấu ấn là một phương pháp xét nghiệm chứ không phải bệnh được chẩn đoán dựa trên triệu chứng, phần này mô tả các phát hiện quan sát được trên mẫu bệnh phẩm và ý nghĩa lâm sàng của chúng.
Tế bào học dấu ấn được áp dụng cho nhiều loại bệnh và tình trạng sau đây.
Bệnh bề mặt nhãn cầu
Khối u
U biểu mô vảy bề mặt nhãn cầu được phân loại thành tân sinh trong biểu mô kết mạc (CIN) và ung thư biểu mô tế bào vảy xâm lấn. Các yếu tố nguy cơ chính như sau:
So sánh các loại giấy lọc.
Màng cellulose acetate
Bộ lọc Millipore lỗ 0,22 μm: Lựa chọn tiêu chuẩn tốt nhất.
Hình dạng: Cắt thành dải 5 mm (một đầu vuông, một đầu thon). Đánh dấu bề mặt để định hướng.
Dùng cho PCR (Phản ứng chuỗi polymerase): Sử dụng bộ lọc tròn đường kính 10 mm.
Màng nitrocellulose
Hình thang (khoảng 3×6 mm): Hình dạng tiêu chuẩn.
Cần phân biệt mặt trước và mặt sau: Mặt nhẵn là mặt trước. Mặt sau (nhám) dính vào biểu mô kết mạc.
Hóa mô miễn dịch: Màng nitrocellulose phù hợp.
Màng Biopore
Ứng dụng trong chẩn đoán bệnh suy tế bào gốc vùng rìa giác mạc: Là lựa chọn cùng với cellulose acetate và nitrocellulose.
Đặc điểm chung: Có thể thu thập 1-3 lớp biểu mô bề mặt.
Vị trí thu thập sẽ bị khuyết biểu mô, có thể gây đau mắt sau khi về nhà. Giải thích trước cho bệnh nhân và kê đơn thuốc nhỏ bảo vệ giác mạc.
Do có khiếm khuyết biểu mô tại vị trí lấy mẫu, bệnh nhân có thể cảm thấy đau mắt khi về nhà. Cần giải thích điều này trước khi xét nghiệm và kê đơn thuốc nhỏ bảo vệ giác mạc để xử lý. Trong hầu hết các trường hợp, khiếm khuyết sẽ tự lành trong vòng vài ngày.
Dưới đây là các kết quả tế bào học in dấu cho các bệnh bề mặt nhãn cầu khác nhau.
Trong chẩn đoán suy giảm tế bào gốc vùng rìa giác mạc, một số ý kiến cho rằng tế bào học in dấu là tiêu chuẩn vàng (mặc dù không được sử dụng rộng rãi trong thực hành lâm sàng).
Sự xuất hiện của tế bào đài trên giác mạc là bằng chứng trực tiếp của sự kết mạc hóa (conjunctivalization) và là cơ sở chẩn đoán. Bộ lọc được áp dụng vào trung tâm giác mạc để kiểm tra sự hiện diện của tế bào đài.
Dưới đây là độ chính xác dự đoán của tế bào học in dấu trong chẩn đoán các khối u khác nhau.
| Bệnh | Độ chính xác dự đoán chẩn đoán |
|---|---|
| U biểu mô vảy bề mặt nhãn cầu (chẩn đoán mô học) | 80% |
| Loạn sản mức độ trung bình | 77% |
| Viêm giác mạc do Acanthamoeba | 94.6% |
Tiêu chuẩn vàng để chẩn đoán xác định u biểu mô bề mặt nhãn cầu là sinh thiết cắt bỏ. Tế bào học ấn và tế bào học bong khó phân biệt tổn thương nông và xâm lấn, do đó không được dùng để chẩn đoán xác định.
Trong u biểu mô bề mặt nhãn cầu trên nền viêm kết mạc mùa xuân mạn tính, khó phân biệt với tăng sản giả biểu mô. Nếu tế bào học ấn phát hiện tế bào biểu mô chứa sắc tố đa hình thái, đó là dấu hiệu gợi ý u biểu mô bề mặt nhãn cầu 1).
Độ chính xác dự đoán chẩn đoán mô học là 80%, và chẩn đoán xác định cần sinh thiết cắt bỏ. Do tế bào học ấn khó phân biệt tổn thương xâm lấn và trong biểu mô, nó được xem là công cụ chẩn đoán hỗ trợ.
Màng lọc cellulose acetate bóc tách lớp nông nhất (1-3 lớp) của biểu mô bề mặt nhãn cầu cùng với chất tiết nhầy.
Khi màng lọc bám chặt, có thể thu được một lớp tế bào xếp chồng nhiều lớp. Điều này cho phép đánh giá hai chiều về hình thái, phân bố và mật độ tế bào.
Trên kết mạc bình thường, tế bào đài phân bố khắp kết mạc. Viêm mạn tính và khô mắt nặng phá hủy tế bào đài và gây chuyển sản biểu mô (vảy). Trong suy giảm tế bào gốc vùng rìa, sự cạn kiệt tế bào gốc vùng rìa làm mất chức năng bổ sung biểu mô giác mạc, dẫn đến kết mạc che phủ bề mặt giác mạc (“kết mạc hóa”). Việc xác định tế bào đài trên giác mạc bằng tế bào học ấn là bằng chứng của sự kết mạc hóa này.
Mặc dù tế bào học dấu ấn là xâm lấn tối thiểu, nhưng nó gây ra khuyết tật biểu mô tại vị trí lấy mẫu, do đó không thể coi là xét nghiệm hoàn toàn không xâm lấn. Trong những năm gần đây, các phương thức mới sau đây đã phát triển.
Đặc điểm của từng phương thức chẩn đoán được trình bày dưới đây.
| Phương thức | Đặc điểm | Ghi chú |
|---|---|---|
| Tế bào học dấu ấn | Có thể đánh giá tế bào đài và hóa mô miễn dịch | Chỉ đánh giá 1-3 lớp, có khuyết tật biểu mô |
| Kính hiển vi đồng tiêu in vivo | Định lượng tế bào với độ phân giải 1-10 μm | Cần sự hợp tác của bệnh nhân trong 5-15 phút |
| Chụp cắt lớp quang học độ phân giải cao | Phân biệt tổn thương xâm lấn và trong biểu mô | Độ dày biểu mô >120 μm gợi ý xâm lấn |
Kính hiển vi đồng tiêu in vivo cho phép quan sát tế bào giác mạc và kết mạc in vivo với độ phân giải 1-10 μm. Có thể định lượng tế bào, nhưng cần sự hợp tác của bệnh nhân trong 5-15 phút.
Chụp cắt lớp quang học độ phân giải cao (OCT đoạn trước độ phân giải cao) hữu ích trong việc phân biệt tổn thương xâm lấn và trong biểu mô bằng cách xác định độ dày biểu mô (>120 μm).
Đối với u biểu mô vảy bề mặt nhãn cầu, một số liệu pháp thuốc như mitomycin C 0,04%, 5-fluorouracil, interferon α-2b, thuốc kháng VEGF, và cidofovir đã được nghiên cứu, nhưng hướng dẫn chính thức vẫn chưa được thiết lập.
Ở một bệnh nhân nam 24 tuổi bị u biểu mô vảy bề mặt nhãn cầu trên nền viêm kết mạc mùa xuân mãn tính, tế bào học dấu ấn phát hiện tế bào biểu mô đa hình chứa sắc tố, và sự thu nhỏ khối u được xác nhận sau hai đợt điều trị mitomycin C 0,04%. Kết quả giải phẫu bệnh từ sinh thiết cắt bỏ sau đó (rìa 4 mm, kỹ thuật không chạm, áp lạnh, và ghép màng ối) cho thấy loạn sản nhẹ đến trung bình, và không có tái phát trong 6 tháng1). Tế bào học dấu ấn cũng được cho là có thể áp dụng để theo dõi sau điều trị mitomycin C.
Kính hiển vi đồng tiêu in vivo và chụp cắt lớp quang học độ phân giải cao là các phương thức không xâm lấn đang phát triển. OCT độ phân giải cao hữu ích trong việc phân biệt tổn thương xâm lấn bằng chỉ số độ dày biểu mô (>120 μm), nhưng cả hai vẫn chứa các yếu tố nghiên cứu. Tế bào học dấu ấn vẫn giữ giá trị riêng trong việc xác định tế bào đài và nhuộm hóa mô miễn dịch.
