La cytologie par empreinte (impression cytology) est une technique peu invasive qui consiste à appliquer un papier filtre en acétate de cellulose sur la surface oculaire pour prélever les cellules épithéliales superficielles, permettant des analyses histologiques, immunohistochimiques et moléculaires.
En 1977, Egbert et al. ont établi la technique pour l’étude des cellules caliciformes conjonctivales, puis Tseng l’a améliorée, élargissant son application clinique aux maladies de la surface oculaire.
Le diagnostic pathologique se divise en histologie et cytologie. La cytologie ne fournissant pas d’informations sur l’architecture tissulaire, elle est considérée comme un examen complémentaire à l’histologie, mais en ophtalmologie, la cytologie est très utile car l’histologie est très invasive.
La cytologie par empreinte décolle l’épithélium avec un papier filtre, prélevant les cellules sous forme de feuillet bidimensionnel. Le frottis conjonctival est réalisé en grattant avec un coton-tige ou une spatule à cytologie. La cytologie par empreinte est supérieure pour évaluer la distribution et la densité des cellules caliciformes.
La cytologie par empreinte étant une méthode d’examen et non une maladie « symptomatique », cette section décrit les observations faites sur les échantillons prélevés et leur signification clinique.
La cytologie par empreinte est applicable à un large éventail de maladies et d’affections suivantes.
Maladies de la surface oculaire
Tumeurs
Les tumeurs épithéliales squameuses de la surface oculaire sont classées en néoplasie intraépithéliale conjonctivale (CIN) et carcinome épidermoïde invasif. Les principaux facteurs de risque sont les suivants :
Comparer les types de papier filtre.
Membrane d'acétate de cellulose
Filtre Millipore de 0,22 µm : le choix standard considéré comme le meilleur.
Forme : coupé en bandes de 5 mm (une extrémité carrée, l’autre effilée). Marquer la surface pour l’orientation.
Usage PCR : utiliser des filtres circulaires de 10 mm de diamètre.
Membrane de nitrocellulose
Bandes trapézoïdales (environ 3×6 mm) : forme standard.
Nécessité de distinguer l’endroit et l’envers : la face lisse est le côté supérieur. La face rugueuse (envers) adhère à l’épithélium conjonctival.
Immunohistochimie : la membrane de nitrocellulose est appropriée.
Membrane Biopore
Application au diagnostic de la déficience en cellules souches limbiques : option avec l’acétate de cellulose et la nitrocellulose.
Caractéristiques communes : permet de prélever 1 à 3 couches d’épithélium superficiel.
La zone prélevée présente une perte épithéliale, ce qui peut provoquer des douleurs oculaires après le retour à domicile. Expliquer au patient à l’avance et prescrire des gouttes de protecteur cornéen.
Un défaut épithélial peut survenir au site de prélèvement, provoquant une douleur oculaire après le retour à domicile. Expliquer avant l’examen et prescrire des collyres protecteurs de la cornée. Dans la plupart des cas, le défaut se répare spontanément en quelques jours.
Les résultats de la cytologie par empreinte pour chaque maladie sont présentés ci-dessous.
Certains considèrent la cytologie par empreinte comme le gold standard pour le diagnostic de l’insuffisance en cellules souches limbiques (bien qu’elle ne soit pas largement utilisée en pratique clinique).
L’apparition de cellules caliciformes sur la cornée est une preuve directe de conjonctivalisation et constitue un critère diagnostique. Appliquer un filtre au centre de la cornée pour vérifier la présence de cellules caliciformes.
La précision prédictive de la cytologie par empreinte pour chaque diagnostic tumoral est présentée ci-dessous.
| Maladie | Précision diagnostique prédictive |
|---|---|
| Tumeur épithéliale squameuse de la surface oculaire (diagnostic histologique) | 80% |
| Dysplasie modérée | 77% |
| Kératite à Acanthamoeba | 94,6% |
Le gold standard pour le diagnostic définitif des tumeurs épithéliales de la surface oculaire est la biopsie excisionnelle. La cytologie par empreinte et la cytologie exfoliative ne permettent pas de distinguer les lésions superficielles des lésions invasives et ne sont donc pas utilisées pour un diagnostic définitif.
Dans les tumeurs épithéliales de la surface oculaire sur fond de kératoconjonctivite vernale chronique, la différenciation avec l’hyperplasie pseudo-épithéliomateuse est difficile. Si la cytologie par empreinte révèle des cellules épithéliales pigmentées pléomorphes, cela peut être un indice suspectant une tumeur épithéliale de la surface oculaire1).
La précision prédictive du diagnostic histologique est de 80 %, et une biopsie excisionnelle est nécessaire pour un diagnostic définitif. La cytologie par empreinte ne permettant pas de distinguer les lésions invasives des lésions intraépithéliales, elle est considérée comme un outil diagnostique auxiliaire.
Le filtre en acétate de cellulose prélève la couche la plus superficielle (1 à 3 couches) de l’épithélium de la surface oculaire, ainsi que les sécrétions muqueuses.
Lorsque le filtre est bien adhéré, il peut prélever une feuille cellulaire stratifiée de plusieurs couches, permettant une évaluation bidimensionnelle de la morphologie, de la distribution et de la densité cellulaires.
Sur la conjonctive normale, les cellules caliciformes sont réparties sur toute la conjonctive. L’inflammation chronique et la sécheresse oculaire sévère détruisent les cellules caliciformes et provoquent une métaplasie épithéliale (squameuse). Dans la déficience en cellules souches limbiques, l’épuisement des cellules souches du limbe entraîne une perte de la capacité à renouveler l’épithélium cornéen, et l’épithélium conjonctival recouvre la surface cornéenne (conjonctivalisation). L’identification de cellules caliciformes sur la cornée par cytologie par empreinte est une preuve de cette conjonctivalisation.
Bien que la cytologie par empreinte soit peu invasive, elle provoque un défaut épithélial au site de prélèvement et n’est donc pas un examen totalement non invasif. Ces dernières années, les nouvelles modalités suivantes se sont développées.
Les caractéristiques de chaque modalité diagnostique sont présentées ci-dessous.
| Modalité | Caractéristiques | Remarques |
|---|---|---|
| Cytologie par empreinte | Évaluation possible des cellules caliciformes et immunohistochimie | Évaluation uniquement des 1 à 3 couches, défaut épithélial présent |
| Microscopie confocale in vivo | Quantification cellulaire avec une résolution de 1 à 10 μm | Nécessite une coopération du patient de 5 à 15 minutes |
| Tomographie par cohérence optique à haute résolution | Distinction entre lésions invasives et intraépithéliales | Épaisseur épithéliale >120 μm suggère une invasion |
Le microscope confocal in vivo permet d’observer les cellules de la cornée et de la conjonctive avec une résolution de 1 à 10 μm. Il permet la quantification cellulaire, mais nécessite la coopération du patient pendant 5 à 15 minutes.
La tomographie par cohérence optique à haute résolution (OCT du segment antérieur à haute résolution) est utile pour distinguer les lésions invasives des lésions intraépithéliales en identifiant un épaississement épithélial (supérieur à 120 μm).
Pour les tumeurs épithéliales de la surface oculaire, plusieurs traitements médicamenteux ont été étudiés, notamment la mitomycine C à 0,04 %, le 5-fluorouracile, l’interféron alpha-2b, les anti-VEGF et le cidofovir, mais il n’existe pas encore de directives officielles.
Chez un homme de 24 ans présentant une tumeur épithéliale de la surface oculaire sur fond de kératoconjonctivite vernale chronique, la cytologie par empreinte a révélé des cellules épithéliales polymorphes contenant des pigments. Après deux cycles de traitement à la mitomycine C à 0,04 %, une réduction tumorale a été observée. L’exérèse-biopsie ultérieure (incluant une marge de 4 mm, technique sans contact, cryothérapie et greffe de membrane amniotique) a montré une dysplasie légère à modérée, et aucune récidive n’a été notée à 6 mois de suivi1). La cytologie par empreinte pourrait également être utilisée pour le suivi après traitement à la mitomycine C.
Le microscope confocal in vivo et la tomographie par cohérence optique à haute résolution sont des modalités non invasives en développement. La tomographie par cohérence optique à haute résolution est utile pour distinguer les lésions invasives en utilisant l’épaississement épithélial (>120 μm) comme indicateur, mais ces deux techniques sont encore au stade de la recherche. La cytologie par empreinte conserve une valeur unique car elle permet l’identification des cellules caliciformes et la coloration immunohistochimique.
