Die Impressionzytologie ist eine minimalinvasive Untersuchungsmethode, bei der ein Zelluloseacetat-Filterpapier auf die Augenoberfläche aufgebracht wird, um oberflächliche Epithelzellen zu entnehmen und histologische, immunhistochemische und molekularbiologische Analysen durchzuführen.
1977 etablierten Egbert et al. die Technik zur Untersuchung von Bindehaut-Becherzellen, später verbesserte Tseng sie, was zu einer breiteren klinischen Anwendung bei Augenoberflächenerkrankungen führte.
Die pathologische Diagnose wird in Histologie und Zytologie unterteilt. Da die Zytologie keine Informationen über die Gewebestruktur liefert, gilt sie als ergänzende Untersuchung zur Histologie. Am Auge ist die Zytologie jedoch aufgrund der hohen Invasivität der Histologie besonders nützlich.
Bei der Impressionzytologie wird das Epithel mit Filterpapier abgezogen und die Zellen als zweidimensionales Blatt entnommen. Beim Bindehautabstrich wird mit einem Wattestäbchen oder einem Zytologiespatel abgeschabt. Die Impressionzytologie ist für die Beurteilung der Verteilung und Dichte von Becherzellen überlegen.
Da die Impressionzytologie eine Untersuchungsmethode und keine Erkrankung mit „Symptomen“ ist, beschreibt dieser Abschnitt die Befunde in den entnommenen Proben und ihre klinische Bedeutung.
Die Impressionzytologie wird bei folgenden breiten Spektrum von Krankheiten und Zuständen angewendet.
Erkrankungen der Augenoberfläche
Tumoren
Plattenepitheltumoren der Augenoberfläche werden in konjunktivale intraepitheliale Neoplasie (CIN) und invasives Plattenepithelkarzinom eingeteilt. Die wichtigsten Risikofaktoren sind:
Vergleichen Sie die Arten von Filterpapier.
Celluloseacetatmembran
Millipore-Filter mit 0,22 µm Porengröße: die als beste angesehene Standardwahl.
Form: in 5 mm lange Streifen geschnitten (ein Ende quadratisch, ein Ende verjüngt). Oberfläche zur Orientierung markieren.
PCR-Verwendung: runde Filter mit 10 mm Durchmesser verwenden.
Nitrocellulosemembran
Trapezförmige Streifen (ca. 3×6 mm): Standardform.
Unterscheidung von Vorder- und Rückseite erforderlich: die glatte Seite ist die Oberseite. Die raue Rückseite wird auf das Bindehautepithel geklebt.
Immunhistochemie: Nitrocellulosemembran ist geeignet.
Biopore-Membran
Anwendung bei der Diagnose des Limbusstammzellmangels: Option neben Celluloseacetat und Nitrocellulose.
Gemeinsame Eigenschaften: kann 1 bis 3 Schichten oberflächliches Epithel entnehmen.
Die Entnahmestelle weist einen Epitheldefekt auf, der nach der Rückkehr nach Hause Augenschmerzen verursachen kann. Den Patienten vorher aufklären und Augentropfen mit Hornhautschutzmittel verschreiben.
An der Entnahmestelle kann ein Epitheldefekt auftreten, der nach der Rückkehr nach Hause Augenschmerzen verursachen kann. Vor der Untersuchung aufklären und schützende Augentropfen für die Hornhaut verschreiben. In den meisten Fällen heilt der Defekt innerhalb weniger Tage von selbst.
Die Befunde der Abdruckzytologie für jede Erkrankung sind unten aufgeführt.
Einige Experten betrachten die Abdruckzytologie als Goldstandard für die Diagnose des Limbusstammzellmangels (obwohl sie klinisch nicht weit verbreitet ist).
Das Auftreten von Becherzellen auf der Hornhaut ist ein direkter Beweis für eine Konjunktivalisierung und dient als diagnostisches Kriterium. Legen Sie einen Filter auf die Hornhautmitte, um das Vorhandensein von Becherzellen zu überprüfen.
Die Vorhersagegenauigkeit der Abdruckzytologie für jede Tumordiagnose ist unten angegeben.
| Erkrankung | Diagnostische Vorhersagegenauigkeit |
|---|---|
| Plattenepitheltumor der Augenoberfläche (histologische Diagnose) | 80% |
| Mäßige Dysplasie | 77% |
| Akanthamöben-Keratitis | 94,6% |
Der Goldstandard für die definitive Diagnose von Plattenepitheltumoren der Augenoberfläche ist die Exzisionsbiopsie. Die Abdruckzytologie und die Exfoliativzytologie können oberflächliche von invasiven Läsionen nicht unterscheiden und werden daher nicht für die definitive Diagnose verwendet.
Bei Plattenepitheltumoren der Augenoberfläche auf dem Hintergrund einer chronischen vernalen Konjunktivitis ist die Abgrenzung zur pseudepitheliomatösen Hyperplasie schwierig. Werden in der Abdruckzytologie polymorphe pigmenthaltige Epithelzellen nachgewiesen, kann dies ein Hinweis auf einen Plattenepitheltumor der Augenoberfläche sein1).
Die Vorhersagegenauigkeit für die histologische Diagnose beträgt 80 %, und für eine definitive Diagnose ist eine Exzisionsbiopsie erforderlich. Da die Abdruckzytologie invasive von intraepithelialen Läsionen nicht unterscheiden kann, wird sie als ergänzendes Diagnosewerkzeug eingestuft.
Der Celluloseacetatfilter entnimmt die oberste Schicht (1–3 Schichten) des Augenoberflächenepithels zusammen mit Schleimsekretionen.
Bei guter Haftung des Filters kann er als mehrschichtiges Zellblatt entnommen werden, was eine zweidimensionale Beurteilung von Zellmorphologie, -verteilung und -dichte ermöglicht.
Auf der normalen Bindehaut sind Becherzellen über die gesamte Bindehaut verteilt. Chronische Entzündungen und schweres trockenes Auge zerstören Becherzellen und führen zu epithelialer Metaplasie (Plattenepithelmetaplasie). Bei Limbusstammzellinsuffizienz führt die Erschöpfung der Stammzellen des Limbus zum Verlust der Fähigkeit, das Hornhautepithel zu erneuern, und das Bindehautepithel bedeckt die Hornhautoberfläche (Konjunktivalisierung). Der Nachweis von Becherzellen auf der Hornhaut mittels Abdruckzytologie ist ein Beweis für diese Konjunktivalisierung.
Obwohl die Abdruckzytologie minimalinvasiv ist, verursacht sie einen Epitheldefekt an der Entnahmestelle und ist daher keine vollständig nicht-invasive Untersuchung. In den letzten Jahren haben sich die folgenden neuen Modalitäten entwickelt.
Die Eigenschaften der einzelnen Diagnosemodalitäten sind unten aufgeführt.
| Modalität | Eigenschaften | Anmerkungen |
|---|---|---|
| Abdruckzytologie | Becherzell- und immunhistochemische Beurteilung möglich | Nur 1–3 Schichten beurteilbar, Epitheldefekt vorhanden |
| In-vivo-Konfokalmikroskopie | Zellquantifizierung mit 1–10 μm Auflösung | 5–15 Minuten Patientenmitarbeit erforderlich |
| Hochauflösende optische Kohärenztomographie | Unterscheidung zwischen invasiven und intraepithelialen Läsionen | Epitheldicke >120 μm deutet auf Invasion hin |
Die konfokale In-vivo-Mikroskopie ermöglicht die Beobachtung von Hornhaut- und Bindehautzellen mit einer Auflösung von 1–10 μm. Sie erlaubt die Quantifizierung von Zellen, erfordert jedoch die Mitarbeit des Patienten für 5–15 Minuten.
Die hochauflösende optische Kohärenztomographie (hochauflösende Vorderabschnitts-OCT) ist nützlich zur Unterscheidung invasiver und intraepithelialer Läsionen durch Identifizierung einer Epithelverdickung (über 120 μm).
Für Plattenepitheltumoren der Augenoberfläche wurden mehrere medikamentöse Therapien untersucht, darunter Mitomycin C 0,04 %, 5-Fluorouracil, Interferon alpha-2b, Anti-VEGF-Medikamente und Cidofovir, jedoch gibt es noch keine offiziellen Leitlinien.
Bei einem 24-jährigen Mann mit einem Plattenepitheltumor der Augenoberfläche auf dem Boden einer chronischen Keratokonjunktivitis vernalis wurden in der Abdruckzytologie polymorphe pigmenthaltige Epithelzellen nachgewiesen. Nach zwei Zyklen Mitomycin C 0,04 % wurde eine Tumorverkleinerung festgestellt. Die anschließende Exzisionsbiopsie (mit 4 mm Rand, No-Touch-Technik, Kryotherapie und Amnionmembrantransplantation) ergab eine leichte bis mittelschwere Dysplasie, und nach 6 Monaten Nachbeobachtung trat kein Rezidiv auf1). Die Abdruckzytologie kann auch zur Überwachung nach Mitomycin-C-Therapie eingesetzt werden.
Die konfokale In-vivo-Mikroskopie und die hochauflösende optische Kohärenztomographie sind sich entwickelnde nicht-invasive Modalitäten. Die hochauflösende optische Kohärenztomographie ist nützlich zur Unterscheidung invasiver Läsionen anhand der Epithelverdickung (>120 μm), aber beide enthalten noch Forschungselemente. Die Abdruckzytologie behält ihren eigenen Wert, da sie die Identifizierung von Becherzellen und immunhistochemische Färbungen ermöglicht.
