La citología por impresión es una prueba mínimamente invasiva que aplica papel de filtro de acetato de celulosa a la superficie ocular para recolectar células epiteliales superficiales y realizar análisis histológicos, inmunohistoquímicos y de biología molecular.
En 1977, Egbert et al. establecieron la técnica para estudiar las células caliciformes conjuntivales, y posteriormente Tseng la mejoró, lo que llevó a una amplia aplicación clínica para enfermedades de la superficie ocular.
El diagnóstico patológico se divide ampliamente en histología y citología. La citología se considera un complemento de la histología porque no proporciona información sobre la estructura del tejido, pero en el ojo, la citología es muy útil porque la histología es más invasiva.
La citología por impresión utiliza papel de filtro para desprender el epitelio y recolectar las células como una lámina bidimensional. Los frotis conjuntivales se recolectan raspando con un hisopo de algodón o una espátula de citología. La citología por impresión es superior para evaluar la distribución y densidad de las células caliciformes.
Dado que la citología por impresión es un método de prueba y no una enfermedad que examine “síntomas”, esta sección describe los hallazgos observados en las muestras recolectadas y su significado clínico.
La citología por impresión se aplica a una amplia gama de enfermedades y condiciones como se indica a continuación.
Enfermedades de la superficie ocular
Tumores
La neoplasia escamosa de la superficie ocular se clasifica en neoplasia intraepitelial conjuntival (CIN) y carcinoma escamoso invasivo. Los principales factores de riesgo son los siguientes.
Comparar los tipos de papel de filtro.
Membrana de acetato de celulosa
Filtro Millipore de 0.22 μm de poro: La opción estándar considerada la mejor.
Forma: Cortar en tiras de 5 mm (un extremo cuadrado, el otro cónico). Marcar la superficie para orientación.
Para PCR (reacción en cadena de la polimerasa): Usar un filtro circular de 10 mm de diámetro.
Membrana de nitrocelulosa
Tira trapezoidal (aproximadamente 3×6 mm): Forma estándar.
Es necesario distinguir el anverso y el reverso: La cara lisa es el anverso. Adherir el reverso (cara rugosa) al epitelio conjuntival.
Inmunohistoquímica: La membrana de nitrocelulosa es adecuada.
Membrana Biopore
Aplicación para el diagnóstico de deficiencia de células madre del limbo corneal: Es una opción junto con acetato de celulosa y nitrocelulosa.
Características comunes: Puede recolectar de 1 a 3 capas de epitelio superficial.
El sitio de recolección se convierte en un defecto epitelial, lo que puede causar dolor ocular después de regresar a casa. Explique esto al paciente de antemano y recete gotas oftálmicas protectoras de la córnea.
Debido a que se produce un defecto epitelial en el sitio de recolección, los pacientes pueden sentir dolor ocular después de regresar a casa. Explique esto antes del examen y recete gotas oftálmicas protectoras de la córnea para manejarlo. En la mayoría de los casos, el defecto se cura naturalmente en unos pocos días.
Los hallazgos de la citología por impresión para cada enfermedad se muestran a continuación.
Algunos consideran que la citología por impresión es el estándar de oro para diagnosticar la deficiencia de células madre del limbo corneal (aunque no se usa ampliamente en la práctica clínica).
La aparición de células caliciformes en la córnea es evidencia directa de conjuntivalización y proporciona una base para el diagnóstico. Aplique un filtro en la córnea central para verificar la presencia de células caliciformes.
La precisión predictiva de la citología por impresión para cada diagnóstico tumoral se muestra a continuación.
| Enfermedad | Precisión predictiva diagnóstica |
|---|---|
| Neoplasia escamosa de la superficie ocular (diagnóstico histológico) | 80% |
| Displasia moderada | 77% |
| Queratitis por Acanthamoeba | 94.6% |
El estándar de oro para el diagnóstico definitivo de la neoplasia escamosa de la superficie ocular es la biopsia por escisión. La citología por impresión y la citología exfoliativa no pueden distinguir de manera confiable entre lesiones superficiales e invasivas y no se utilizan para el diagnóstico definitivo.
En la neoplasia escamosa de la superficie ocular que surge de la queratoconjuntivitis vernal crónica, la diferenciación de la hiperplasia pseudoepiteliomatosa es difícil. Si se detectan células epiteliales pigmentadas pleomórficas en la citología por impresión, puede ser un indicio para sospechar neoplasia escamosa de la superficie ocular 1).
La precisión de la predicción del diagnóstico histológico es del 80%, y se requiere una biopsia por escisión para el diagnóstico definitivo. Debido a que la citología por impresión no puede distinguir de manera confiable entre lesiones invasivas e intraepiteliales, se considera una herramienta de diagnóstico auxiliar.
El filtro de acetato de celulosa funciona desprendiendo las capas más superficiales (1 a 3 capas) del epitelio de la superficie ocular junto con las secreciones mucosas.
Cuando el filtro se adhiere firmemente, puede recolectar varias capas de láminas celulares estratificadas, lo que permite la evaluación bidimensional de la morfología, distribución y densidad celular.
En la conjuntiva normal, las células caliciformes se distribuyen por toda la conjuntiva. La inflamación crónica y el ojo seco severo destruyen las células caliciformes y causan metaplasia epitelial (metaplasia escamosa). En la deficiencia de células madre del limbo, el agotamiento de las células madre del limbo conduce a la pérdida de la capacidad de reponer el epitelio corneal, lo que resulta en una “conjuntivalización” donde el epitelio conjuntival cubre la superficie corneal. La identificación de células caliciformes en la córnea mediante citología por impresión es evidencia de esta conjuntivalización.
Aunque la citología por impresión es mínimamente invasiva, produce defectos epiteliales en el sitio de recolección, por lo que no es una prueba completamente no invasiva. En los últimos años, se han desarrollado las siguientes nuevas modalidades.
Las características de cada modalidad diagnóstica se muestran a continuación.
| Modalidad | Características | Observaciones |
|---|---|---|
| Citología por impresión | Permite evaluación de células caliciformes e inmunohistoquímica | Evalúa solo 1–3 capas; defectos epiteliales presentes |
| Microscopía confocal in vivo | Cuantificación celular con resolución de 1–10 μm | Requiere cooperación del paciente durante 5–15 minutos |
| Tomografía de coherencia óptica de alta resolución | Distingue lesiones invasivas de intraepiteliales | Grosor epitelial >120 μm sugiere invasión |
La microscopía confocal in vivo permite observar las células corneales y conjuntivales en tejido vivo con una resolución de 1 a 10 μm. Permite la cuantificación celular, pero requiere la cooperación del paciente durante 5 a 15 minutos.
La tomografía de coherencia óptica de alta resolución (OCT de segmento anterior de alta resolución) se considera útil para distinguir entre lesiones invasivas e intraepiteliales mediante la identificación de engrosamiento epitelial (mayor de 120 μm).
Para la neoplasia escamosa de la superficie ocular se han investigado varios tratamientos farmacológicos, incluyendo mitomicina C al 0.04%, 5-fluorouracilo, interferón alfa-2b, agentes anti-VEGF y cidofovir, pero aún no se han establecido guías oficiales.
En un varón de 24 años con neoplasia escamosa de la superficie ocular sobre un fondo de queratoconjuntivitis vernal crónica, la citología por impresión detectó células epiteliales pleomórficas con pigmento, y se confirmó la reducción tumoral tras dos ciclos de tratamiento con mitomicina C al 0.04%. La biopsia por escisión posterior (incluyendo márgenes de 4 mm, técnica sin contacto, crioterapia y trasplante de membrana amniótica) mostró displasia leve a moderada, y no se observó recurrencia durante 6 meses de seguimiento 1). La citología por impresión también se considera aplicable para el monitoreo después del tratamiento con mitomicina C.
La microscopía confocal in vivo y la tomografía de coherencia óptica de alta resolución son modalidades no invasivas en desarrollo. La OCT de alta resolución se considera útil para distinguir lesiones invasivas basándose en el engrosamiento epitelial (>120 μm), pero ambas aún contienen elementos en fase de investigación. La citología por impresión conserva su valor único en la capacidad de identificar células caliciformes y realizar tinciones inmunohistoquímicas.
