Импрессионная цитология — это малоинвазивный метод исследования, при котором ацетатцеллюлозную фильтровальную бумагу прикладывают к поверхности глаза для забора поверхностных эпителиальных клеток с последующим гистологическим, иммуногистохимическим и молекулярно-биологическим анализом.
В 1977 году Egbert et al. разработали методику для исследования бокаловидных клеток конъюнктивы, а затем Tseng усовершенствовал её, что привело к широкому клиническому применению при заболеваниях глазной поверхности.
Патологическая диагностика делится на гистологию и цитологию. Цитология не дает информации о структуре ткани, поэтому считается вспомогательным методом по отношению к гистологии, однако в офтальмологии цитология очень полезна из-за высокой инвазивности гистологии.
При импрессионной цитологии эпителий отслаивают фильтровальной бумагой, забирая клетки в виде двумерного листа. При мазке конъюнктивы соскоб проводят ватным тампоном или цитологической лопаточкой. Импрессионная цитология превосходит мазок в оценке распределения и плотности бокаловидных клеток.
Поскольку импрессионная цитология является методом исследования, а не заболеванием с «симптомами», в данном разделе описываются находки, наблюдаемые в полученных образцах, и их клиническое значение.
Импрессионная цитология применяется при следующем широком спектре заболеваний и состояний.
Заболевания поверхности глаза
Опухоли
Плоскоклеточные опухоли поверхности глаза подразделяются на конъюнктивальную интраэпителиальную неоплазию (CIN) и инвазивный плоскоклеточный рак. Основные факторы риска следующие:
Сравните типы фильтровальной бумаги.
Мембрана из ацетата целлюлозы
Фильтр Millipore с порами 0,22 мкм: стандартный выбор, считающийся наилучшим.
Форма: нарезать полосками по 5 мм (один конец квадратный, другой сужающийся). Пометьте поверхность для ориентации.
Для ПЦР: используйте круглые фильтры диаметром 10 мм.
Нитратцеллюлозная мембрана
Трапециевидные полоски (примерно 3×6 мм): стандартная форма.
Необходимо различать лицевую и изнаночную стороны: гладкая сторона — лицевая. Шероховатую (изнаночную) сторону приклеивают к конъюнктивальному эпителию.
Иммуногистохимия: подходит нитратцеллюлозная мембрана.
Мембрана Biopore
Применение для диагностики недостаточности лимбальных стволовых клеток: вариант наряду с ацетатом целлюлозы и нитратцеллюлозой.
Общие характеристики: позволяет получить 1–3 слоя поверхностного эпителия.
Место забора представляет собой дефект эпителия, что может вызвать боль в глазу после возвращения домой. Заранее объясните пациенту и назначьте глазные капли с защитным средством для роговицы.
На месте взятия образца может возникнуть дефект эпителия, что может вызвать боль в глазу после возвращения домой. Объясните это перед исследованием и назначьте защитные капли для роговицы. В большинстве случаев дефект спонтанно заживает в течение нескольких дней.
Результаты импрессионной цитологии для каждого заболевания приведены ниже.
Некоторые специалисты считают импрессионную цитологию золотым стандартом диагностики недостаточности лимбальных стволовых клеток (хотя клинически она широко не используется).
Появление бокаловидных клеток на роговице является прямым доказательством конъюнктивализации и служит диагностическим критерием. Приложите фильтр к центру роговицы для проверки наличия бокаловидных клеток.
Прогностическая точность импрессионной цитологии для каждой опухоли приведена ниже.
| Заболевание | Диагностическая прогностическая точность |
|---|---|
| Плоскоклеточная опухоль поверхности глаза (гистологический диагноз) | 80% |
| Умеренная дисплазия | 77% |
| Акантамебный кератит | 94,6% |
Золотым стандартом окончательной диагностики плоскоклеточных опухолей поверхности глаза является эксцизионная биопсия. Импрессионная цитология и эксфолиативная цитология не позволяют различить поверхностные и инвазивные поражения, поэтому не используются для окончательной диагностики.
При плоскоклеточных опухолях поверхности глаза на фоне хронического весеннего катара трудно отличить от псевдоэпителиоматозной гиперплазии. Если при импрессионной цитологии обнаруживаются полиморфные пигментированные эпителиальные клетки, это может быть признаком, вызывающим подозрение на плоскоклеточную опухоль поверхности глаза1).
Точность прогнозирования гистологического диагноза составляет 80%, и для окончательной диагностики требуется эксцизионная биопсия. Поскольку импрессионная цитология не позволяет различить инвазивные и интраэпителиальные поражения, она рассматривается как вспомогательный диагностический инструмент.
Фильтр из ацетата целлюлозы снимает самый поверхностный слой (1–3 слоя) эпителия поверхности глаза вместе со слизистыми выделениями.
При хорошем прилегании фильтра его можно удалить в виде многослойного клеточного листа, что позволяет двухмерно оценить морфологию, распределение и плотность клеток.
На нормальной конъюнктиве бокаловидные клетки распределены по всей конъюнктиве. Хроническое воспаление и тяжелая сухость глаз разрушают бокаловидные клетки и вызывают эпителиальную метаплазию (плоскоклеточную метаплазию). При недостаточности лимбальных стволовых клеток истощение стволовых клеток лимба приводит к потере способности восполнять роговичный эпителий, и конъюнктивальный эпителий покрывает поверхность роговицы (конъюнктивализация). Обнаружение бокаловидных клеток на роговице с помощью импрессионной цитологии является доказательством этой конъюнктивализации.
Хотя импрессионная цитология является малоинвазивной, она вызывает дефект эпителия в месте забора, поэтому не является полностью неинвазивным исследованием. В последние годы развиваются следующие новые методы.
Характеристики каждого диагностического метода приведены ниже.
| Метод | Характеристики | Примечания |
|---|---|---|
| Импрессионная цитология | Возможна оценка бокаловидных клеток и иммуногистохимия | Оценка только 1–3 слоев, наличие дефекта эпителия |
| Прижизненная конфокальная микроскопия | Количественная оценка клеток с разрешением 1–10 мкм | Требуется сотрудничество пациента в течение 5–15 минут |
| Высокоразрешающая оптическая когерентная томография | Различие между инвазивными и интраэпителиальными поражениями | Толщина эпителия >120 мкм указывает на инвазию |
Конфокальная микроскопия in vivo позволяет наблюдать клетки роговицы и конъюнктивы с разрешением 1–10 мкм. Она позволяет проводить количественную оценку клеток, но требует сотрудничества пациента в течение 5–15 минут.
Высокоразрешающая оптическая когерентная томография (высокоразрешающая ОКТ переднего сегмента) полезна для различения инвазивных и интраэпителиальных поражений путем выявления утолщения эпителия (более 120 мкм).
Для плоскоклеточных опухолей поверхности глаза изучались несколько медикаментозных методов лечения, включая митомицин C 0,04%, 5-фторурацил, интерферон альфа-2b, анти-VEGF препараты и цидофовир, однако официальные рекомендации пока не установлены.
У 24-летнего мужчины с плоскоклеточной опухолью поверхности глаза на фоне хронического весеннего кератоконъюнктивита при импрессионной цитологии были обнаружены полиморфные эпителиальные клетки, содержащие пигмент. После двух циклов лечения митомицином C 0,04% было отмечено уменьшение опухоли. Последующая эксцизионная биопсия (с отступом 4 мм, техникой «без касания», криотерапией и трансплантацией амниотической мембраны) показала легкую и умеренную дисплазию, и через 6 месяцев наблюдения рецидива не было1). Импрессионная цитология может также применяться для мониторинга после лечения митомицином C.
Конфокальная микроскопия in vivo и высокоразрешающая оптическая когерентная томография являются развивающимися неинвазивными методами. Высокоразрешающая оптическая когерентная томография полезна для различения инвазивных поражений по признаку утолщения эпителия (>120 мкм), но оба метода содержат элементы исследования. Импрессионная цитология сохраняет свою уникальную ценность благодаря возможности идентификации бокаловидных клеток и иммуногистохимического окрашивания.
