سیتولوژی و کشت ملتحمه (آزمایش‌های عفونت و آلرژی)

نکات اصلی این آزمایش

• سیتولوژی و کشت از خراش ملتحمه برای شناسایی عامل بیماری‌زا در بیماری‌های عفونی چشم، انجام آزمون حساسیت دارویی و تأیید بیماری آلرژیک ملتحمه استفاده می‌شود.
• نرخ مثبت بودن در بررسی میکروسکوپی اسمیر 58.1 تا 73.7 درصد و در کشت 37.6 تا 74.3 درصد است؛ نمونه‌گیری پیش از شروع آنتی‌بیوتیک‌ها به‌طور قابل‌توجهی بر نرخ مثبت بودن اثر می‌گذارد¹⁾
• بسته به هدف، یکی از پنج روش رنگ‌آمیزی (Giemsa، Gram، Fungiflora Y®، روش آنتی‌بادی فلورسنت، رنگ‌آمیزی هانسل) را انتخاب کنید.
• آزمایش ائوزینوفیل (رنگ‌آمیزی هانسل) با مشاهده حتی یک ائوزینوفیل، بیماری آلرژیک ملتحمه را تأیید می‌کند²⁾
• مرز بین ضایعه و بافت طبیعی را با اسپاتولای کیمورا یا چاقوی گلف بتراشید و نمونه را با سواب الیاف مصنوعی جمع‌آوری کنید.
• حتی با مثبت شدن کشت، ممکن است نتوان عامل بیماری‌زا را به‌طور قطعی تعیین کرد. تصمیم‌گیری باید بر اساس یافته‌های اسمیر، یافته‌های چشمی، حساسیت دارویی و پاسخ به درمان به‌صورت جامع انجام شود.
• در تشخیص کراتیت عفونی، بررسی میکروسکوپی اسمیر و کشت به‌شدت توصیه می‌شود (سطح شواهد: C)¹⁾

1. سیتولوژی و کشت از خراش ملتحمه چیست

سیتولوژی خراش ملتحمه و کشت میکروبی، آزمایش‌هایی هستند که برای شناسایی عامل بیماری‌زا در بیماری‌های عفونی چشم، انجام آزمون حساسیت دارویی و تأیید ائوزینوفیل‌ها در بیماری آلرژیک ملتحمه (تشخیص قطعی) به کار می‌روند. با شناسایی زودهنگام عامل بیماری‌زا و انتخاب آنتی‌بیوتیک مؤثر، می‌توان انتظار بهبود علائم عفونت را داشت.

راهنمای تشخیص و درمان کراتیت عفونی (ویرایش سوم) در صورت شک به کراتیت عفونی، انجام بررسی میکروسکوپی اسمیر و کشت را به‌شدت توصیه می‌کند (سطح شواهد: C)¹⁾. این‌ها به‌ویژه در موارد کراتیت فوری یا اندوفتالمیت، یا زمانی که وجود عامل بیماری‌زای غیرمعمول مطرح است، آزمایش‌های ضروری محسوب می‌شوند.

در راهنمای تشخیص و درمان بیماری آلرژیک ملتحمه (ویرایش سوم)، آزمایش ائوزینوفیل (رنگ‌آمیزی هانسل) به‌روشنی به‌عنوان پایه تشخیص قطعی ذکر شده است و برای ارتقای تشخیص بالینی به تشخیص قطعی، آزمایشی ضروری است²⁾.

اندیکاسیون‌ها

هنگام شک به بیماری عفونی

• کراتیت و کونژکتیویت باکتریایی (به‌ویژه موارد اورژانسی)
• کونژکتیویت گونوکوکی (تشخیص زودهنگام مهم است، زیرا می‌تواند به سوراخ‌شدن قرنیه منجر شود)
• کراتیت آکانتامبا (کشت در مراکز معمولی دشوار است، بنابراین بررسی میکروسکوپی توصیه می‌شود)
• کراتیت قارچی
• مواردی که به عامل عفونی خاصی مشکوک هستیم (مانند کراتیت مقاوم یا درمان‌ناپذیر)

تشخیص قطعی بیماری‌های چشمی آلرژیک

• کونژکتیویت آلرژیک (تشخیص قطعی با بررسی ائوزینوفیل‌ها)
• کراتوکونژکتیویت بهاری (vernal keratoconjunctivitis: VKC)
• کراتوکونژکتیویت آتوپیک (atopic keratoconjunctivitis: AKC)

Q چه زمانی بررسی خراش‌برداری ملتحمه انجام می‌شود؟

A

این کار عمدتاً برای دو هدف انجام می‌شود. نخست، وقتی کراتیت یا کونژکتیویت عفونی مطرح باشد؛ به‌ویژه در عفونت‌های اورژانسی مانند کراتیت و اندوفتالمیت، یا وقتی عوامل بیماری‌زای خاص مانند گونوکوک، آکانتاموبا یا قارچ‌ها مطرح باشند، این آزمایش ضروری است. دوم، برای تأیید بیماری آلرژیک ملتحمه؛ اگر حتی یک ائوزینوفیل در رنگ‌آمیزی Hansel دیده شود، تشخیص قطعی می‌شود. یافته‌های بالینی به‌تنهایی فقط تشخیص بالینی را ممکن می‌کنند، بنابراین وقتی تشخیص قطعی لازم باشد، بررسی ائوزینوفیل انجام می‌شود.

2. روش نمونه‌گیری

اصل بر این است که نمونه از ناحیه‌ای که وجود عامل بیماری‌زا در آن مشکوک است، به‌خوبی گرفته شود. زمان نمونه‌گیری تأثیر زیادی بر درصد مثبت دارد. میزان مثبت بودن کشت پیش از مصرف آنتی‌بیوتیک 77.3٪ است، در حالی که پس از درمان به 37.8٪ کاهش می‌یابد ¹⁾. حتماً پیش از تجویز آنتی‌بیوتیک نمونه‌گیری کنید.

آماده‌سازی و مراحل

• بی‌حسی: از بی‌حسی قطره‌ای چشم استفاده شود. نوع بدون نگهدارنده ترجیح دارد (برای جلوگیری از اثر نگهدارنده‌ها بر میکروارگانیسم‌ها)
• ابزار نمونه‌گیری: اسپاتول کیمورا یا چاقوی گلف (برای خراش دادن ملتحمه و قرنیه). یا سواب از الیاف مصنوعی
• محل نمونه‌گیری: ناحیه مرزی بین ضایعه و بافت طبیعی را خراش دهید. چون میکروب‌ها در مرز بین ناحیه ملتهب و قرنیه طبیعی وجود دارند، آن ناحیه مرزی مناسب‌ترین محل است
• پیشگیری از خشک شدن: هنگام نمونه‌گیری با سواب، سواب را از قبل با سالین استریل مرطوب کنید. خشک شدن کیفیت نمونه را کاهش می‌دهد
• جنس سواب: از سواب‌های الیاف مصنوعی استفاده شود. مواد طبیعی ممکن است بر رشد میکروارگانیسم‌ها و روش آزمایش اثر بگذارند

نکات احتیاطی

• در بعضی موارد ضایعه بسیار شکننده است. با زور خراش ندهید
• گزارش شده است که درصد مثبت بودن کشت در خراش ضایعه با سواب حدود 50٪ و با سوزن 23G برابر 35٪ است ¹⁾
• اگر مقدار نمونه کم باشد، اولویت آزمایش‌ها را به‌طور واضح در آزمایشگاه ذکر کنید

Q در هنگام گرفتن نمونه به چه نکاتی باید توجه کرد؟

A

مهم‌ترین نکته این است که نمونه قبل از تجویز آنتی‌بیوتیک گرفته شود. پس از مصرف آنتی‌بیوتیک، میزان مثبت شدن کشت به‌طور چشمگیری از 77.3% به 37.8% کاهش می‌یابد. محل نمونه‌برداری باید ناحیه مرزی بین ضایعه و بافت طبیعی باشد؛ نه مرکز التهاب، بلکه حاشیه را بتراشید. برای جلوگیری از خشک شدن، سواب را از قبل با سرم فیزیولوژیک استریل مرطوب کنید. ابزار نمونه‌برداری می‌تواند سواب الیاف مصنوعی یا Kimura spatula یا golf knife باشد و این کار زیر بی‌حسی موضعی انجام شود. اگر ضایعه شکننده است، با زور تراش ندهید.

3. لایه‌برداری و بررسی میکروسکوپی (روش‌های رنگ‌آمیزی و تفسیر)

ارزیابی تراکم سلول‌های جامی با سیتولوژی ایمپرشن ملتحمه (رنگ‌آمیزی PAS-هماتوکسیلین)

Usuba FS, de Medeiros-Ribeiro AC, Novaes P, et al. Dry eye in rheumatoid arthritis patients under TNF-inhibitors: conjunctival goblet cell as an early ocular biomarker. Sci Rep. 2020;10:14054. Figure 2. PMCID: PMC7441175. License: CC BY.

تصویر نمونه از سیتولوژی ایمپرشن ملتحمه (IC) با رنگ‌آمیزی PAS-هماتوکسیلین. (A) پایه: درجه 2 بر اساس طبقه‌بندی نلسون (100–350 cells/mm²، غیرطبیعی)، (B) پس از 12 ماه درمان با مهارکننده TNF: درجه 0 (>500 cells/mm²، طبیعی). این با تغییرات مورفولوژیک سلول‌های اپی‌تلیال ملتحمه و سلول‌های جامی که در لایه‌برداری و بررسی میکروسکوپی، از جمله رنگ‌آمیزی گیمسا، ارزیابی می‌شوند، مطابقت دارد؛ در بخش ‘3. لایه‌برداری و بررسی میکروسکوپی (روش‌های رنگ‌آمیزی و تفسیر)’ آمده است.

نمونه جمع‌آوری‌شده روی لام شیشه‌ای مالیده می‌شود، رنگ‌آمیزی شده و زیر میکروسکوپ نوری مشاهده می‌شود. میزان مثبت بودن بررسی لایه‌برداری و میکروسکوپی 58.1–73.7% گزارش شده است¹⁾.

مراحل آماده‌سازی نمونه

1. لام شیشه‌ای را با الکل تمیز کنید و ناحیه مالیدن نمونه را از پشت با مداد الماسی یا ماژیک مشخص کنید
2. مواد را به صورت لایه‌ای نازک و با پخش ملایم روی لام بمالید. در مورد سواب، اگر مقدار نمونه کم است با فشار ملایم مانند زدن مهر بمالید؛ اگر مقدار کافی است با حرکت غلتاندن پخش کنید
3. با متیل الکل یا شعله ثابت کنید

انتخاب روش رنگ‌آمیزی

بسته به هدف، از میان پنج روش رنگ‌آمیزی انتخاب می‌شود.

• رنگ‌آمیزی گیمسا (Diff-Quik™): روشی چندمنظوره برای رنگ‌آمیزی که برای غربالگری، از جمله علل عفونی و غیرعفونی، به کار می‌رود. با کیت رنگ‌آمیزی سریع (Diff-Quik™)، در حدود ۱۵ ثانیه رنگ‌آمیزی معادل روش معمول به دست می‌آید. همه میکروارگانیسم‌ها آبی رنگ می‌شوند، اما نمی‌توان بین گرم‌مثبت و گرم‌منفی تفاوت گذاشت¹⁾
• رنگ‌آمیزی گرم: روشی تخصصی برای عفونت‌های باکتریایی است. این روش امکان تمایز باکتری‌های گرم‌مثبت و گرم‌منفی و بررسی شکل باکتری (کوکسی یا باسیل) را فراهم می‌کند. با استفاده از Faver G (Nissui Pharmaceutical)، این کار حدود ۳ دقیقه طول می‌کشد¹⁾
• رنگ‌آمیزی FungiFloraY®: یک رنگ فلورسنت از نوع اسید استیلبن سولفونیک است. این رنگ به‌طور انتخابی پلی‌ساکاریدهای با پیوند β (کیتین و سلولز) را رنگ می‌کند و قارچ‌ها (هیف و مخمر) و کیست‌های آکانتامبا را با حساسیت بالا آشکار می‌سازد. مشاهده با میکروسکوپ فلورسانس لازم است¹⁾
• ایمنوفلورسانس: آنتی‌ژن‌های ویروسی مانند HSV (ویروس هرپس سیمپلکس) و VZV (ویروس واریسلا-زوستر) را مستقیماً نشان می‌دهد¹⁾
• رنگ‌آمیزی هانسل: رنگ‌آمیزی ویژه‌ای که برای شناسایی ائوزینوفیل‌ها در بیماری‌های آلرژیک ملتحمه به کار می‌رود

بزرگنمایی در میکروسکوپی

• ۴۰۰ برابر: برای شناسایی نوع سلول‌های التهابی به کار می‌رود (قطر نوتروفیل‌ها حدود ۱۲ تا ۱۵ میکرومتر است). در عفونت باکتریایی نوتروفیل‌ها غالب‌اند؛ در عفونت ویروسی لنفوسیت‌ها غالب‌اند
• ۱۰۰۰ برابر با روغن ایمرسون: برای مشاهده میکروارگانیسم‌ها به کار می‌رود (قطر باکتری‌ها حدود ۱٫۰ میکرومتر است)

روش‌های رنگ‌آمیزی و یافته‌های شاخص بر اساس عامل بیماری‌زا

عامل بیماری‌زای مشکوک	رنگ‌آمیزی پیشنهادی	یافته‌های شاخص
باکتری‌ها (به‌طور کلی)	رنگ‌آمیزی گرم	کوکسی‌ها و باسیل‌های گرم‌مثبت/گرم‌منفی
گونوکوک	Diff-Quik™	دیپلوکوک‌های شبیه دانه قهوه؛ داخل نوتروفیل‌ها
قارچ‌ها	Fungiflora Y®	هیف‌ها و کنیدیاها (فلورسنت)
آکانتامبا	Fungiflora Y®	کیست‌های دو جداره (حدود ۱۰×۱۰ میکرومتر)
ویروس‌ها (مانند HSV)	روش آنتی‌بادی فلورسنت	فلورسانس اختصاصی در سلول‌های آلوده
ائوزینوفیل‌ها (آلرژی)	رنگ‌آمیزی هانسل	مثبت حتی با وجود فقط 1 ائوزینوفیل

4. آزمایش کشت

در آزمایش کشت، میکروارگانیسم عامل روی محیط کشت رشد داده می‌شود و شناسایی آن و آزمایش حساسیت دارویی را ممکن می‌کند. نرخ مثبت شدن کشت بسته به مرکز و شرایط، از 37.6 تا 74.3% ¹⁾ متغیر است. از آنجا که فلور طبیعی در سطح خارجی چشم وجود دارد، میکروارگانیسم جداشده لزوماً عامل بیماری نیست. تصمیم‌گیری باید به‌طور جامع و بر اساس نتایج میکروسکوپی، یافته‌های چشمی، حساسیت دارویی و پاسخ به درمان انجام شود.

انواع اصلی محیط کشت

محیط کشت	میکروارگانیسم هدف	شرایط کشت
محیط آگار خون	باکتری‌های شایع (امکان بررسی همولیز وجود دارد)	37°C، هوازی
محیط آگار شکلاتی	هموفیلوس و گونوکوک‌ها (حاوی عوامل V و X)	37°C، CO2
محیط سابورو/دکستروز سیب‌زمینی	قارچ‌ها	در دو شرایط 37°C و دمای اتاق کشت می‌شود
پلیت آگار NN 1.5%	آکانتاموبا	30°C
محیط حمل‌ونقل (Seed Swab®، Transwab® و غیره)	باکتری‌های شایع (وقتی مرکز محیط جامد ندارد)	حمل در دمای اتاق (نرخ مثبت 50–69%)1)

نگهداری نمونه

روش نگهداری نمونه وقتی انتقال آن به آزمایشگاه زمان‌بر است، بسته به نوع میکروب عامل بیماری متفاوت است.

• باکتری‌های شایع: در 4°C (یخچال) نگهداری شود
• گونوکوک و مننگوکوک: در دمای اتاق نگهداری شود، چون به سرما حساس‌اند و به‌راحتی از بین می‌روند
• اگر به باکتری‌های بی‌هوازی اجباری مشکوک است: در ظرف حمل بی‌هوازی نگهداری شود

نکات مهم هنگام درخواست آزمایش

• یافته‌های بالینی و میکروارگانیسم هدف را در فرم درخواست به‌طور واضح بنویسید. افزودن محیط‌های انتخابی، میزان تشخیص را افزایش می‌دهد
• اگر مقدار نمونه کم است، اولویت آزمایش‌ها را ذکر کنید (برای مثال: کشت > میکروسکوپی، باکتری > قارچ)

تفسیر آزمون حساسیت دارویی

در آزمون حساسیت دارویی، معمولاً دارویی با MIC (حداقل غلظت مهارکننده) پایین‌تر از میان داروهای ارزیابی‌شده به‌صورت S (حساس) انتخاب می‌شود. با این حال، حتی اگر دارو R (مقاوم) تشخیص داده شود، ممکن است از نظر بالینی مؤثر باشد؛ بنابراین ارزیابی کلی لازم است. توجه داشته باشید که برای آزمون حساسیت دارویی قارچ‌ها و آکانتامبا معیارهای تفسیر هنوز تعیین نشده‌اند ¹⁾.

Q اگر در آزمایش کشت میکروبی ارگانیسمی دیده نشود، چگونه باید آن را تفسیر کرد؟

A

میزان مثبت بودن کشت 37.6 تا 74.3 درصد است و نتیجه منفی عفونت را رد نمی‌کند. مهم‌ترین عامل، زمان نمونه‌گیری است؛ اگر نمونه پس از مصرف داروی ضدمیکروبی گرفته شود، میزان مثبت بودن حدوداً به نصف کاهش می‌یابد. همچنین، میزان مثبت بودن کشت در موارد اسمیر منفی 42.7 تا 47.1 درصد و در موارد اسمیر مثبت 57.1 تا 82.4 درصد است، بنابراین ترکیب هر دو آزمایش دقت تشخیص را افزایش می‌دهد. از آنجا که آکانتامبا در مراکز عمومی به‌سختی جدا و کشت می‌شود، باید معاینه میکروسکوپی با رنگ‌آمیزی Diff-Quik™ برای تأیید ساختار دولایه کیست در اولویت قرار گیرد.

5. آزمایش ائوزینوفیل (تشخیص قطعی بیماری ملتحمه آلرژیک)

رنگ‌آمیزی گیمسا از بافت ملتحمه در ورم ملتحمه آلرژیک (نفوذ ائوزینوفیل)

Kimura M, Ando T, Kume Y, et al. A nerve-goblet cell association promotes allergic conjunctivitis through rapid antigen passage. JCI Insight. 2023;8(21):e168596. Figure 1. PMCID: PMC10721269. License: CC BY.

رنگ‌آمیزی گیمسا از بافت ملتحمه در یک مدل ورم ملتحمه آلرژیک (×200). پیکان‌ها ائوزینوفیل‌ها را نشان می‌دهند و تصویر بزرگ‌نمایی‌شده (نوار مقیاس 10 میکرومتر) شکل سلولی مشخص با هسته‌های دولُبی و گرانول‌های ائوزینوفیلیک را نشان می‌دهد. این با شناسایی ائوزینوفیل در بیماری ملتحمه آلرژیک که در بخش 5، آزمایش ائوزینوفیل (تشخیص قطعی بیماری ملتحمه آلرژیک)، در متن اصلی آمده است، مطابقت دارد.

برای تشخیص قطعی بیماری ملتحمه آلرژیک، باید ائوزینوفیل‌ها در اسمیر خراش ملتحمه که با رنگ هانسل رنگ‌آمیزی شده است، شناسایی شوند ²⁾.

روش نمونه‌گیری

1. پس از بی‌حسی موضعی، پلک بالا را برگردانید
2. ملتحمه پلکی را با میله شیشه‌ای به‌آرامی ماساژ دهید و مخاط جمع‌شده روی سطح ملتحمه را با پنس یا اسپاتولا جمع کنید
3. روی لام پخش کنید، رنگ‌آمیزی هانسل را انجام دهید و زیر میکروسکوپ نوری مشاهده کنید

تفسیر

اگر حتی یک ائوزینوفیل زیر میکروسکوپ مشاهده شود، نتیجه مثبت تلقی می‌شود و تشخیص قطعی بیماری ملتحمه آلرژیک را تأیید می‌کند²⁾. اگر هنگام نمونه‌گیری خونریزی دیده شود، ممکن است ائوزینوفیل‌های خون با نمونه مخلوط شوند، بنابراین باید در چشم دیگر دوباره آزمایش انجام شود.

نظام تشخیصی بیماری ملتحمه آلرژیک

سه مرحله تشخیص بر اساس راهنمای بالینی بیماری ملتحمه آلرژیک (ویرایش سوم) به شرح زیر است²⁾.

دسته تشخیص	شرایط لازم
تشخیص بالینی	فقط یافته‌های بالینی (علائم و نشانه‌های آلرژیک)
تشخیص بالینی قطعی	یافته‌های بالینی + تأیید استعداد آلرژیک (IgE کل اشک مثبت، تست پوستی، IgE اختصاصی آنتی‌ژن در سرم مثبت)
تشخیص قطعی	یافته‌های بالینی + آزمایش ائوزینوفیل مثبت (تأیید واکنش آلرژیک موضعی در چشم)

تشخیص بالینی قطعی فقط استعداد آلرژیک سیستمیک را تأیید می‌کند و واکنش آلرژیک در خودِ چشم را به طور مستقیم ثابت نمی‌کند. تنها زمانی که آزمایش ائوزینوفیل واکنش آلرژیک موضعی در چشم را به طور مستقیم ثابت کند، تشخیص قطعی محسوب می‌شود²⁾.

6. تفسیر نتایج آزمایش و ارزیابی کلی

تخمین عامل بیماری‌زا بر اساس نوع سلول‌های التهابی

حتی اگر میکروب‌ها دیده نشوند، نوع سلول‌های التهابی می‌تواند سرنخی برای حدس زدن عامل بیماری‌زا باشد.

• غلبه نوتروفیل‌ها → به نفع عفونت باکتریایی
• غلبه لنفوسیت‌ها → به نفع عفونت ویروسی
• غلبه ائوزینوفیل‌ها → به نفع عفونت آلرژیک یا انگلی

ارزیابی کلی عامل ایجادکننده

اینکه میکروب جداشده عامل ایجادکننده باشد یا نه، به‌صورت کلی ارزیابی می‌شود.

• تطابق بین نتیجه بررسی میکروسکوپی و میکروب جداشده در کشت (آیا میکروب دیده‌شده در میکروسکوپ با میکروب رشدکرده در کشت یکسان است)
• تطابق با یافته‌های چشمی (آیا نمونه از محل ضایعه گرفته شده است)
• تطابق بین نتیجه آزمون حساسیت دارویی و اثر واقعی درمان

توجه به عوامل بیماری‌زای خاص

• گنوکوک: به خشکی و تغییرات دما حساس است و به‌راحتی از بین می‌رود. پردازش فوری پس از نمونه‌گیری ضروری است. نگهداری در یخچال مناسب نیست (در دمای اتاق نگهداری شود)
• آکانتامبا: جداسازی و کشت آن در مراکز عمومی دشوار است. در رنگ‌آمیزی Dif-Quik™ باید تأیید کیست‌های دارای دیواره دوگانه در اولویت قرار گیرد

ترکیب بررسی میکروسکوپی اسمیر و آزمایش کشت

حتی در مواردی که بررسی میکروسکوپی اسمیر منفی است، میزان مثبت شدن کشت می‌تواند به 42.7–47.1% برسد¹⁾. از سوی دیگر، در موارد اسمیر مثبت، میزان مثبت شدن کشت 57.1–82.4% است و انجام هم‌زمان هر دو آزمایش حساسیت را افزایش می‌دهد. آزمایش PCR به‌عنوان کمک‌کننده به بررسی میکروسکوپی اسمیر و کشت مفید است، اما تشخیص کراتیت باکتریایی فقط بر اساس PCR توصیه نمی‌شود¹⁾.

7. جدیدترین پژوهش‌ها و چشم‌اندازهای آینده

توجه: اطلاعات زیر در مرحله پژوهش است

محتوای زیر در حال حاضر در مرحله پژوهش یا آزمایش است و جزو آزمایش‌های استاندارد قابل انجام در بیمارستان‌های عمومی نیست. این اطلاعات مرجع برای متخصصان درباره پیشرفت‌های آینده پزشکی است.

• تحلیل متاژنومی (توالی‌یابی نسل جدید): به‌تدریج امکان تحلیل جامع میکروبیوم سطح چشم، از جمله میکروارگانیسم‌های غیرقابل کشت، فراهم می‌شود. انتظار می‌رود عوامل بیماری‌زایی که با کشت‌های معمول قابل شناسایی نیستند، شناسایی شوند
• PCR چندگانه: توسعه سامانه‌هایی که بتوانند چندین عامل بیماری‌زا (باکتری، قارچ، ویروس و آکانتامبا) را به‌طور هم‌زمان و سریع در یک آزمایش شناسایی کنند، در حال پیشرفت است. انتظار می‌رود دقت و سرعت تشخیص کراتیت عفونی افزایش یابد³⁾
• طیف‌سنجی جرمی MALDI-TOF: روشی از طیف‌سنجی جرمی که می‌تواند باکتری‌های کشت‌شده را در عرض چند دقیقه شناسایی کند. در مقایسه با روش‌های بیوشیمیایی سنتی، می‌تواند زمان را به‌طور قابل توجهی کاهش دهد و کاربرد آن در عفونت‌های چشمی در حال بررسی است⁴⁾
• دقیق‌تر کردن حساسیت و ویژگی آزمایش ائوزینوفیل: توسعه روش‌های تشخیص با حساسیت بالا برای ائوزینوفیل با استفاده از میکروسکوپ الکترونی و آنتی‌بادی‌های نشان‌دار با فلورسانس در حال پیشرفت است. رنگ‌آمیزی سنتی Hansel در حساسیت تشخیص محدودیت دارد و اگر روش حساس‌تری برقرار شود، دقت تشخیص می‌تواند افزایش یابد

8. منابع

1. 日本眼感染症学会感染性角膜炎診療ガイドライン第3版作成委員会. 感染性角膜炎診療ガイドライン(第3版). 日眼会誌. 2023;127(10):859-895.
2. 日本眼科アレルギー学会診療ガイドライン作成委員会. アレルギー性結膜疾患診療ガイドライン（第3版）. 日眼会誌. 2021;125(8):741-785.
3. Liu HY, Hopping GC, Vaidyanathan U, Ronquillo YC, Hoopes PC, Moshirfar M. Polymerase Chain Reaction and Its Application in the Diagnosis of Infectious Keratitis. Med Hypothesis Discov Innov Ophthalmol. 2019;8(3):152-155. PMID:31598517; PMCID:PMC6778471.
4. Taravati P, Lam D, Van Gelder RN. Role of molecular diagnostics in ocular microbiology. Curr Ophthalmol Rep. 2013;1(4):170-178.