कंजंक्टाइवल साइटोलॉजी और कल्चर (संक्रमण और एलर्जी जांच)

इस जांच के मुख्य बिंदु

• कंजंक्टाइवल स्क्रैपिंग की साइटोलॉजी और कल्चर का उपयोग संक्रामक नेत्र रोगों में कारण जीव की पहचान, दवा संवेदनशीलता परीक्षण, और एलर्जिक कंजंक्टाइवल रोग की पुष्टि के लिए किया जाता है।
• स्मियर माइक्रोस्कोपी की पॉजिटिव दर 58.1–73.7% है, और कल्चर की पॉजिटिव दर 37.6–74.3% है; एंटीबायोटिक शुरू करने से पहले नमूना लेना पॉजिटिव दर को बहुत प्रभावित करता है¹⁾
• उद्देश्य के अनुसार पाँच रंगाई विधियों (Giemsa, Gram, Fungiflora Y®, फ्लोरेसेंट एंटीबॉडी विधि, Hansel stain) में से चुनें।
• ईओसिनोफिल जांच (Hansel stain) में केवल एक ईओसिनोफिल मिलने पर भी एलर्जिक कंजंक्टाइवल रोग की पुष्टि हो जाती है²⁾
• Kimura spatula या golf knife से घाव और सामान्य ऊतक की सीमा को खुरचें, और सैंपल को सिंथेटिक फाइबर स्वैब से लें।
• कल्चर पॉजिटिव होने पर भी कारण जीव की पुष्टि हमेशा नहीं हो पाती। स्मियर निष्कर्ष, नेत्र निष्कर्ष, दवा संवेदनशीलता और उपचार प्रतिक्रिया के आधार पर समग्र निर्णय लें।
• संक्रामक केराटाइटिस के निदान में स्मियर माइक्रोस्कोपी और कल्चर की दृढ़ सिफारिश की जाती है (साक्ष्य स्तर: C)¹⁾

1. कंजंक्टाइवल स्क्रैपिंग की साइटोलॉजी और कल्चर क्या है

कंजंक्टाइवल स्क्रैपिंग की साइटोलॉजी और माइक्रोबियल कल्चर ऐसे परीक्षण हैं जिनका उपयोग संक्रामक नेत्र रोगों में कारण जीव की पहचान, दवा संवेदनशीलता परीक्षण, और एलर्जिक कंजंक्टाइवल रोग में ईओसिनोफिल की पुष्टि (निश्चित निदान) के लिए किया जाता है। कारण जीव की जल्दी पहचान कर और प्रभावी एंटीबायोटिक चुनकर संक्रमण के लक्षणों में सुधार की उम्मीद की जा सकती है।

संक्रामक केराटाइटिस निदान एवं उपचार दिशानिर्देश (तीसरा संस्करण) में, संक्रामक केराटाइटिस का संदेह होने पर स्मियर माइक्रोस्कोपी और कल्चर करने की दृढ़ सिफारिश की गई है (साक्ष्य स्तर: C)¹⁾। विशेष रूप से आपातकालीन केराटाइटिस या एंडोफ्थैल्माइटिस, या किसी असामान्य कारण जीव का संदेह होने पर, इन्हें आवश्यक जांच माना जाता है।

एलर्जिक कंजंक्टाइवल रोग निदान एवं उपचार दिशानिर्देश (तीसरा संस्करण) में, ईओसिनोफिल जांच (Hansel stain) को निश्चित निदान का आधार स्पष्ट रूप से बताया गया है, और नैदानिक निदान को निश्चित निदान में बदलने के लिए यह एक अनिवार्य जांच है²⁾।

संकेत

जब संक्रामक रोग का संदेह हो

• बैक्टीरियल केराटाइटिस और कंजंक्टिवाइटिस (विशेष रूप से आपात स्थिति में)
• गोनोकोकल कंजंक्टिवाइटिस (जल्दी पहचान महत्वपूर्ण है क्योंकि इससे कॉर्नियल परफ़ोरेशन हो सकता है)
• अकैंथअमीबा केराटाइटिस (सामान्य संस्थानों में कल्चर कठिन होता है, इसलिए सूक्ष्मदर्शी परीक्षण की सलाह दी जाती है)
• फंगल केराटाइटिस
• ऐसे मामले जिनमें किसी विशेष रोगजनक का संदेह हो (जैसे कठिन-उपचार या उपचार-प्रतिरोधी केराटाइटिस)

एलर्जिक नेत्र रोग का निश्चित निदान

• एलर्जिक कंजंक्टिवाइटिस (ईओसिनोफिल परीक्षण से निश्चित निदान)
• वर्नल केराटोकंजंक्टिवाइटिस (vernal keratoconjunctivitis: VKC)
• एटोपिक केराटोकंजंक्टिवाइटिस (atopic keratoconjunctivitis: AKC)

Q कंजंक्टिवल स्क्रैपिंग जांच कब की जाती है?

A

यह मुख्यतः दो उद्देश्यों के लिए किया जाता है। पहला, जब संक्रामक केराटाइटिस या कंजंक्टिवाइटिस का संदेह हो; विशेष रूप से केराटाइटिस और एंडोफ्थैल्माइटिस जैसी आपात संक्रमणों में, या गोनोकोकस, एकैंथअमीबा या फफूंद जैसे विशेष रोगकारकों का संदेह होने पर यह एक आवश्यक जांच है। दूसरा, एलर्जिक कंजंक्टिवल रोग की पुष्टि के लिए; हांसल स्टेनिंग में यदि एक भी ईओसिनोफिल मिल जाए, तो पक्का निदान हो जाता है। केवल नैदानिक लक्षणों से केवल क्लिनिकल निदान ही हो पाता है, इसलिए जब निश्चित निदान की आवश्यकता हो तब ईओसिनोफिल की जांच की जाती है।

2. नमूना लेने की तकनीक

सिद्धांत यह है कि जिस स्थान पर रोगकारक होने का संदेह हो, वहाँ से नमूना अच्छी तरह लिया जाए। नमूना लेने का समय पॉज़िटिव दर को बहुत प्रभावित करता है। एंटीबायोटिक देने से पहले कल्चर की पॉज़िटिव दर 77.3% होती है, जबकि देने के बाद यह 37.8% तक घट जाती है ¹⁾। एंटीबायोटिक देने से पहले नमूना अवश्य लें।

तैयारी और प्रक्रिया

• सुन्न करना: आई ड्रॉप एनेस्थीसिया का उपयोग करें। बिना प्रिज़र्वेटिव वाली तैयारी बेहतर है (ताकि प्रिज़र्वेटिव का सूक्ष्मजीवों पर प्रभाव न पड़े)
• सैंपल लेने का उपकरण: किमुरा स्पैचुला या गोल्फ चाकू (कंजंक्टाइवा और कॉर्निया की स्क्रैपिंग के लिए)। या सिंथेटिक फाइबर स्वैब
• सैंपल लेने का स्थान: घाव और सामान्य ऊतक की सीमा वाले क्षेत्र को स्क्रैप करें। क्योंकि सूजन वाले भाग और सामान्य कॉर्निया की सीमा पर कीटाणु होते हैं, इसलिए वही सीमा क्षेत्र सबसे उपयुक्त है
• सूखने से बचाव: स्वैब से नमूना लेते समय पहले स्वैब को स्टरल सलाइन से नम कर लें। सूखने से नमूने की गुणवत्ता घटती है
• स्वैब की सामग्री: सिंथेटिक फाइबर वाली सामग्री उपयोग करें। प्राकृतिक सामग्री सूक्ष्मजीवों की वृद्धि और जांच विधि को प्रभावित कर सकती है

सावधानियाँ

• कुछ मामलों में घाव बहुत नाज़ुक होता है। ज़ोर से स्क्रैप न करें
• रिपोर्टों के अनुसार, स्वैब से घाव की स्क्रैपिंग में कल्चर की पॉज़िटिव दर लगभग 50% होती है, और 23G सुई से 35% होती है ¹⁾
• यदि नमूने की मात्रा कम हो, तो प्रयोगशाला को जांच की प्राथमिकता स्पष्ट रूप से लिखें

Q नमूना लेते समय किन बातों का ध्यान रखना चाहिए?

A

सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि नमूना एंटीबायोटिक देने से पहले लिया जाए। एंटीबायोटिक देने के बाद कल्चर की पॉजिटिव दर 77.3% से घटकर 37.8% रह जाती है। नमूना लेने का स्थान घाव और सामान्य ऊतक के बीच की सीमा होनी चाहिए; सूजन के केंद्र को नहीं, बल्कि किनारे को खुरचें। सूखने से बचाने के लिए स्वैब को पहले ही स्टरल सलाइन से नम कर लें। नमूना लेने के उपकरण के रूप में सिंथेटिक-फाइबर स्वैब या Kimura spatula या golf knife का उपयोग करें, और इसे टॉपिकल एनेस्थीसिया के तहत करें। यदि घाव नाजुक हो, तो जोर से खुरचें नहीं।

3. स्मीयर और सूक्ष्मदर्शी जांच (रंगाई विधियां और व्याख्या)

कंजंक्टाइवल इम्प्रेशन साइटोलॉजी (PAS-हेमाटॉक्सिलिन स्टेनिंग) द्वारा गॉब्लेट सेल घनत्व का मूल्यांकन

Usuba FS, de Medeiros-Ribeiro AC, Novaes P, et al. Dry eye in rheumatoid arthritis patients under TNF-inhibitors: conjunctival goblet cell as an early ocular biomarker. Sci Rep. 2020;10:14054. Figure 2. PMCID: PMC7441175. License: CC BY.

PAS-हेमाटॉक्सिलिन स्टेनिंग के साथ कंजंक्टाइवल इम्प्रेशन साइटोलॉजी (IC) की प्रतिनिधि छवि। (A) बेसलाइन: नेलसन वर्गीकरण ग्रेड 2 (100–350 cells/mm², असामान्य), (B) TNF inhibitor के 12 महीने बाद: ग्रेड 0 (>500 cells/mm², सामान्य)। यह कंजंक्टाइवल उपकला कोशिकाओं और गॉब्लेट कोशिकाओं में होने वाले रूपात्मक परिवर्तनों से संबंधित है, जिनका मूल्यांकन स्मीयर और सूक्ष्मदर्शी जांच में, जिसमें Giemsa staining भी शामिल है, किया जाता है; यह ‘3. स्मीयर और सूक्ष्मदर्शी जांच (रंगाई विधियां और व्याख्या)’ अनुभाग में वर्णित है.

एकत्रित नमूने को स्लाइड ग्लास पर फैलाकर रंगा जाता है और फिर प्रकाश सूक्ष्मदर्शी से देखा जाता है। स्मीयर सूक्ष्मदर्शी जांच की पॉजिटिव दर 58.1–73.7% बताई गई है¹⁾.

नमूना तैयारी की प्रक्रिया

1. स्लाइड ग्लास को अल्कोहल से साफ करें, और नमूना फैलाने वाले हिस्से को पीछे की ओर डायमंड पेंसिल या मार्कर से घेरकर चिह्नित करें
2. सामग्री को हल्के से फैलाते हुए पतली परत में लगाएं। स्वैब के मामले में, यदि नमूना कम हो तो हल्के दबाव से जैसे स्टैम्प लगाते हैं वैसे फैलाएं; यदि पर्याप्त मात्रा हो तो घुमाते हुए फैलाएं
3. मेथिल अल्कोहल या लौ से फिक्स करें

रंगाई विधि का चयन

उद्देश्य के अनुसार 5 प्रकार की रंगाई विधियों में से चुनें।

• गिम्सा रंगाई (Diff-Quik™): जांच के लिए उपयोग की जाने वाली बहुउद्देश्यीय रंगाई विधि, जो संक्रमणजन्य और गैर-संक्रमणजन्य दोनों कारणों में काम आती है। त्वरित रंगाई किट (Diff-Quik™) से लगभग 15 सेकंड में पारंपरिक विधि के समान रंगाई प्राप्त की जा सकती है। सभी सूक्ष्मजीव नीले रंग में रंगते हैं, लेकिन ग्राम-पॉजिटिव और ग्राम-नेगेटिव में अंतर नहीं किया जा सकता¹⁾
• ग्राम रंगाई: बैक्टीरियल संक्रमणों के लिए विशेष रंगाई विधि। इससे ग्राम-पॉजिटिव और ग्राम-नेगेटिव का अंतर किया जा सकता है और बैक्टीरिया का आकार (कॉकस या बैसिलस) देखा जा सकता है। Faver G (Nissui Pharmaceutical) का उपयोग करने पर यह लगभग 3 मिनट में पूरा हो जाता है¹⁾
• FungiFloraY® रंगाई: स्टिलबीन सल्फोनिक अम्ल प्रकार का फ्लोरेसेंट डाई। यह β-बंधित पॉलीसैकराइड्स (काइटिन और सेल्यूलोज) को चयनात्मक रूप से रंगता है और फंगस (हाइफ़े और यीस्ट) तथा Acanthamoeba के सिस्ट को संवेदनशीलता से पहचानता है। फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप से अवलोकन आवश्यक है¹⁾
• इम्यूनोफ्लोरेसेंस: HSV (हर्पीज सिम्प्लेक्स वायरस) और VZV (वैरिसेला-जोस्टर वायरस) जैसे वायरल एंटीजन को सीधे दिखाता है¹⁾
• Hansel रंगाई: एलर्जिक कंजंक्टाइवल रोग में इओसिनोफिल्स का पता लगाने के लिए उपयोग की जाने वाली विशेष रंगाई

सूक्ष्मदर्शी का आवर्धन

• 400x: सूजन कोशिकाओं के प्रकार की पहचान के लिए उपयोग किया जाता है (न्यूट्रोफिल का व्यास लगभग 12–15 μm होता है)। बैक्टीरियल संक्रमण में न्यूट्रोफिल प्रमुख होते हैं; वायरल संक्रमण में लिम्फोसाइट प्रमुख होते हैं
• 1000x ऑयल इमर्शन: सूक्ष्मजीवों को देखने के लिए उपयोग किया जाता है (बैक्टीरिया का व्यास लगभग 1.0 μm होता है)

रोगजनक के अनुसार रंगाई विधियाँ और विशिष्ट निष्कर्ष

संदिग्ध रोगजनक	अनुशंसित रंगाई	विशिष्ट निष्कर्ष
बैक्टीरिया (सामान्य)	ग्राम रंगाई	ग्राम-पॉजिटिव/ग्राम-नेगेटिव कोक्की और बैसिली
गोनोकोकस	Diff-Quik™	कॉफी-बीन्स जैसे डिप्लोकोकस; न्यूट्रोफिल के भीतर
फफूंद	Fungiflora Y®	हाइफ़ा और कोनिडिया (प्रतिदीप्त)
अकैंथअमीबा	Fungiflora Y®	दोहरी दीवार वाले सिस्ट (लगभग 10×10 μm)
वायरस (HSV आदि)	फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी विधि	संक्रमित कोशिकाओं में विशिष्ट फ्लोरेसेंस
ईओसिनोफिल (एलर्जी)	हैंसल स्टेन	केवल 1 ईओसिनोफिल होने पर भी पॉजिटिव

4. कल्चर जांच

कल्चर जांच में कारण सूक्ष्मजीव को कल्चर माध्यम पर बढ़ाया जाता है, जिससे उसकी पहचान और दवा संवेदनशीलता परीक्षण संभव हो जाता है। कल्चर पॉजिटिव दर संस्था और परिस्थितियों के अनुसार 37.6 से 74.3% तक होती है ¹⁾। बाह्य नेत्र सतह पर सामान्य फ्लोरा मौजूद होने के कारण अलग किया गया जीवाणु हमेशा कारण नहीं होता। सूक्ष्मदर्शी जांच के परिणाम, नेत्र संबंधी निष्कर्ष, दवा संवेदनशीलता और उपचार प्रतिक्रिया के आधार पर समग्र रूप से निर्णय लिया जाता है।

कल्चर माध्यम के मुख्य प्रकार

कल्चर माध्यम	लक्षित सूक्ष्मजीव	कल्चर की स्थितियां
रक्त अग्र माध्यम	सामान्य बैक्टीरिया (हीमोलाइसिस का आकलन किया जा सकता है)	37°C, एरोबिक
चॉकलेट अग्र माध्यम	Haemophilus और gonococci (V और X कारक होते हैं)	37°C, CO2
साबरो/पोटैटो डेक्सट्रोज माध्यम	फफूंद	37°C और कमरे के तापमान, दो स्थितियों में कल्चर किया जाता है
1.5% NN अग्र प्लेट	अकैंथअमीबा	30°C
परिवहन माध्यम (Seed Swab®, Transwab® आदि)	सामान्य बैक्टीरिया (जब संस्थान में ठोस माध्यम न हो)	कमरे के तापमान पर परिवहन (पॉजिटिविटी दर 50–69%)1)

नमूने का संग्रहण

जांच प्रयोगशाला तक भेजने में समय लगने पर नमूना कैसे रखा जाए, यह रोग पैदा करने वाले जीव के प्रकार पर निर्भर करता है।

• सामान्य बैक्टीरिया: 4°C (फ्रिज) पर रखें
• गोनोकोकस और मेनिंगोकोकस: ठंड के प्रति संवेदनशील होने और आसानी से मर जाने के कारण कमरे के तापमान पर रखें
• यदि अनिवार्य एनारोबिक बैक्टीरिया का संदेह हो: एनारोबिक ट्रांसपोर्ट कंटेनर में रखें

जांच ऑर्डर करने के मुख्य बिंदु

• रिक्वेस्ट फॉर्म में नैदानिक निष्कर्ष और लक्षित सूक्ष्मजीव स्पष्ट रूप से लिखें। चयनात्मक माध्यम जोड़ने से पहचान दर बढ़ती है
• यदि नमूने की मात्रा कम हो, तो जांच की प्राथमिकता लिखें (उदाहरण: कल्चर > माइक्रोस्कोपी, बैक्टीरिया > फफूंद)

दवा संवेदनशीलता परीक्षण की व्याख्या

संवेदनशीलता परीक्षण में, S (sensitive) के रूप में आंके गए दवाओं में से कम MIC (न्यूनतम अवरोधक सांद्रता) वाली दवा अक्सर चुनी जाती है। हालांकि, R (resistant) मानी जाने पर भी वह चिकित्सकीय रूप से प्रभावी हो सकती है, इसलिए समग्र मूल्यांकन आवश्यक है। ध्यान दें कि फंगल और Acanthamoeba के औषधि-संवेदनशीलता परीक्षण के लिए व्याख्या के मानदंड अभी स्थापित नहीं हैं ¹⁾।

Q यदि कल्चर परीक्षण में जीव नहीं मिलते, तो इसका क्या अर्थ लगाया जाए?

A

कल्चर पॉजिटिविटी 37.6–74.3% है, और नकारात्मक परिणाम संक्रमण को नहीं नकारता। सबसे अधिक प्रभाव डालने वाला कारक नमूना लेने का समय है; एंटीमाइक्रोबियल देने के बाद नमूना लेने पर पॉजिटिविटी लगभग आधी रह जाती है। साथ ही, स्मीयर-नकारात्मक मामलों में कल्चर पॉजिटिविटी 42.7–47.1% और स्मीयर-पॉजिटिव मामलों में 57.1–82.4% होती है, इसलिए दोनों परीक्षणों को साथ मिलाने से निदान की सटीकता बढ़ती है। Acanthamoeba को सामान्य सुविधाओं में अलग करना और कल्चर करना कठिन होने के कारण, सिस्ट की दोहरी दीवार संरचना की पुष्टि के लिए Diff-Quik™ स्टेनिंग के साथ सूक्ष्मदर्शी जांच को प्राथमिकता दी जाती है.

5. ईओसिनोफिल जांच (एलर्जिक कंजंक्टिवल रोग का निश्चित निदान)

एलर्जिक कंजंक्टिवाइटिस में कंजंक्टिवल ऊतक की Giemsa स्टेनिंग (ईओसिनोफिल का प्रवेश)

Kimura M, Ando T, Kume Y, et al. A nerve-goblet cell association promotes allergic conjunctivitis through rapid antigen passage. JCI Insight. 2023;8(21):e168596. Figure 1. PMCID: PMC10721269. License: CC BY.

एलर्जिक कंजंक्टिवाइटिस मॉडल में कंजंक्टिवल ऊतक की Giemsa स्टेनिंग (×200). तीरचिह्न ईओसिनोफिल को दर्शाते हैं, और बड़ा किया गया चित्र (स्केल बार 10 μm) द्विलोबी नाभिक और ईओसिनोफिलिक कणिकाओं वाली विशिष्ट कोशिका आकृति दिखाता है। यह मुख्य पाठ के खंड 5, ईओसिनोफिल जांच (एलर्जिक कंजंक्टिवल रोग का निश्चित निदान), में वर्णित एलर्जिक कंजंक्टिवल रोग में ईओसिनोफिल पहचान से मेल खाता है.

एलर्जिक कंजंक्टिवल रोग के निश्चित निदान के लिए Hansel से रंगे कंजंक्टिवल स्क्रैपिंग स्मीयर में ईओसिनोफिल का पता लगाना आवश्यक है ²⁾.

नमूना लेने की तकनीक

1. टॉपिकल एनेस्थीसिया के बाद ऊपरी पलकों को उलटें
2. कांच की छड़ी से पलक की कंजंक्टिवा को हल्के से मालिश करें, और कंजंक्टिवल सतह पर जमा श्लेष्म को फोर्सेप्स या स्पैटुला से एकत्र करें
3. स्लाइड पर स्मीयर करें, Hansel स्टेनिंग करें, और प्रकाश सूक्ष्मदर्शी से देखें

व्याख्या

यदि सूक्ष्मदर्शी के नीचे एक भी ईओसिनोफिल दिखाई दे, तो उसे सकारात्मक माना जाता है, और इससे एलर्जिक कंजंक्टिवल रोग का निश्चित निदान हो जाता है²⁾। यदि नमूना लेते समय रक्तस्राव हो, तो रक्त के ईओसिनोफिल नमूने में मिल सकते हैं, इसलिए दूसरे नेत्र में फिर से जांच की जाती है।

एलर्जिक कंजंक्टिवल रोग की निदान प्रणाली

एलर्जिक कंजंक्टिवल रोग के क्लिनिकल प्रैक्टिस गाइडलाइन (तीसरा संस्करण) पर आधारित निदान के तीन चरण निम्नलिखित हैं²⁾।

निदान श्रेणी	आवश्यक शर्तें
नैदानिक निदान	केवल नैदानिक निष्कर्ष (एलर्जिक लक्षण और संकेत)
नैदानिक निश्चित निदान	नैदानिक निष्कर्ष + एलर्जिक प्रवृत्ति की पुष्टि (आँसुओं में कुल IgE सकारात्मक, त्वचा परीक्षण, सीरम एंटीजन-विशिष्ट IgE सकारात्मक)
निश्चित निदान	नैदानिक निष्कर्ष + ईओसिनोफिल परीक्षण सकारात्मक (आँख में स्थानीय एलर्जिक प्रतिक्रिया की पुष्टि)

नैदानिक निश्चित निदान केवल प्रणालीगत एलर्जिक प्रवृत्ति की पुष्टि करता है और आँख में स्थानीय एलर्जिक प्रतिक्रिया को सीधे सिद्ध नहीं करता। ईओसिनोफिल परीक्षण से जब आँख में स्थानीय एलर्जिक प्रतिक्रिया सीधे सिद्ध होती है, तभी निश्चित निदान माना जाता है²⁾.

6. जांच परिणामों की व्याख्या और समग्र मूल्यांकन

सूजन कोशिकाओं के प्रकार के आधार पर रोगजनक का अनुमान

भले ही जीवाणु न मिले हों, सूजन कोशिकाओं का प्रकार रोगजनक का अनुमान लगाने का संकेत दे सकता है।

• न्यूट्रोफिल का प्रभुत्व → जीवाणु संक्रमण का संकेत
• लिम्फोसाइट का प्रभुत्व → वायरल संक्रमण का संकेत
• ईओसिनोफिल का प्रभुत्व → एलर्जिक या परजीवी संक्रमण का संकेत

कारक जीवाणु का समग्र मूल्यांकन

अलग किए गए जीवाणु के कारक जीवाणु होने या न होने का निर्णय समग्र रूप से किया जाता है।

• सूक्ष्मदर्शी निष्कर्ष और कल्चर से अलग किए गए जीवाणु की समानता (सूक्ष्मदर्शी में दिखा जीवाणु और कल्चर में बढ़ा जीवाणु एक ही है या नहीं)
• आंख के निष्कर्षों से संगति (क्या नमूना घाव वाले स्थान से लिया गया था)
• औषधि संवेदनशीलता परीक्षण के परिणाम और वास्तविक उपचार प्रभाव की संगति

विशेष रोगजनकों पर ध्यान दें

• गोनोकोकस: यह सूखने और तापमान में बदलाव के प्रति संवेदनशील होता है, इसलिए आसानी से नष्ट हो जाता है। नमूना लेने के तुरंत बाद उसका प्रसंस्करण आवश्यक है। रेफ्रिजरेटर में रखना उपयुक्त नहीं है (कमरे के तापमान पर रखें)
• अकैंथअमीबा: सामान्य सुविधाओं में इसे अलग करके संवर्धित करना कठिन होता है। Dif-Quik™ रंगाई में दोहरी दीवार वाले सिस्ट की पुष्टि को प्राथमिकता दी जाती है

स्मीयर माइक्रोस्कोपी और कल्चर जांच का संयोजन

स्मीयर माइक्रोस्कोपी में नकारात्मक मामलों में भी कल्चर की पॉजिटिव दर 42.7–47.1% तक पहुंच सकती है¹⁾। दूसरी ओर, स्मीयर पॉजिटिव मामलों में कल्चर की पॉजिटिव दर 57.1–82.4% होती है, और दोनों जांचें एक साथ करने से संवेदनशीलता बढ़ती है। PCR जांच स्मीयर माइक्रोस्कोपी और कल्चर जांच के सहायक के रूप में उपयोगी है, लेकिन केवल PCR के आधार पर बैक्टीरियल केराटाइटिस का निदान करना अनुशंसित नहीं है¹⁾।

7. नवीनतम अनुसंधान और भविष्य की संभावनाएँ

ध्यान दें: निम्न जानकारी अनुसंधान चरण में है

निम्न सामग्री वर्तमान में अनुसंधान चरण या परीक्षण में है और सामान्य अस्पतालों में उपलब्ध मानक जांच का हिस्सा नहीं है। यह भविष्य की चिकित्सा प्रगति के बारे में विशेषज्ञों के लिए संदर्भ जानकारी है।

• मेटाजेनोमिक विश्लेषण (नेक्स्ट-जेनरेशन सीक्वेंसिंग): अब आंख की सतह के माइक्रोबायोम का समग्र विश्लेषण संभव होता जा रहा है, जिसमें वे सूक्ष्मजीव भी शामिल हैं जिन्हें संवर्धित नहीं किया जा सकता। पारंपरिक कल्चर जांच से पहचाने न जा सकने वाले रोगजनकों का पता लगाने की उम्मीद है
• मल्टीप्लेक्स PCR: ऐसे सिस्टम विकसित किए जा रहे हैं जो एक ही जांच में कई रोगजनकों (बैक्टीरिया, फफूंद, वायरस और अकैंथअमीबा) का एक साथ तेज़ी से पता लगा सकें। संक्रामक केराटाइटिस के निदान की सटीकता और गति में सुधार की उम्मीद है³⁾
• MALDI-TOF मास स्पेक्ट्रोमेट्री: एक ऐसी मास स्पेक्ट्रोमेट्री तकनीक जो संवर्धित जीवाणुओं की पहचान कुछ ही मिनटों में कर सकती है। पारंपरिक जैव-रासायनिक पहचान विधियों की तुलना में यह समय को काफी कम कर सकती है, और नेत्र संक्रमणों में इसके उपयोग पर शोध हो रहा है⁴⁾
• ईओसिनोफिल जांच की संवेदनशीलता और विशिष्टता का परिष्करण: इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी और फ्लोरोसेंट-लेबल्ड एंटीबॉडी का उपयोग करके ईओसिनोफिल की उच्च-संवेदनशील पहचान विधियों का विकास चल रहा है। पारंपरिक Hansel staining की पहचान संवेदनशीलता सीमित है, और यदि अधिक संवेदनशील विधि स्थापित हो जाती है, तो निदान की सटीकता बेहतर हो सकती है

8. संदर्भ

1. 日本眼感染症学会感染性角膜炎診療ガイドライン第3版作成委員会. 感染性角膜炎診療ガイドライン(第3版). 日眼会誌. 2023;127(10):859-895.
2. 日本眼科アレルギー学会診療ガイドライン作成委員会. アレルギー性結膜疾患診療ガイドライン（第3版）. 日眼会誌. 2021;125(8):741-785.
3. Liu HY, Hopping GC, Vaidyanathan U, Ronquillo YC, Hoopes PC, Moshirfar M. Polymerase Chain Reaction and Its Application in the Diagnosis of Infectious Keratitis. Med Hypothesis Discov Innov Ophthalmol. 2019;8(3):152-155. PMID:31598517; PMCID:PMC6778471.
4. Taravati P, Lam D, Van Gelder RN. Role of molecular diagnostics in ocular microbiology. Curr Ophthalmol Rep. 2013;1(4):170-178.