कॉर्निया और कंजंक्टाइवा की जीवित रंगाई (ocular surface vital staining) एक मूल नेत्र परीक्षण है, जिसमें रंगों की मदद से आंख की सतह पर कॉर्नियल और कंजंक्टाइवल उपकला की क्षति को दिखाई देने योग्य बनाया जाता है और उस क्षति के वितरण और गंभीरता का मात्रात्मक आकलन किया जाता है।
मुख्य रूप से उपयोग किए जाने वाले रंग निम्न तीन हैं।
इस जांच के मुख्य उद्देश्य इस प्रकार हैं:
2016 के ड्राई आई क्लिनिकल प्रैक्टिस गाइडलाइन में, टियर फिल्म ब्रेकअप टाइम (BUT) की माप और फ्लोरेसीन स्टेनिंग को मिलाकर की गई जांच को ड्राई आई निदान का मुख्य आधार माना गया है1)। 2006 संस्करण में कॉर्निया और कंजंक्टाइवा के एपिथेलियल नुकसान को ड्राई आई निदान के लिए आवश्यक माना जाता था, लेकिन 2016 संस्करण में एपिथेलियल नुकसान अनिवार्य शर्त नहीं रहा, और निदान BUT के कम होने और मरीज के लक्षणों पर आधारित हो गया। फिर भी, विटल स्टेनिंग एपिथेलियल नुकसान की मात्रा और पैटर्न को वस्तुनिष्ठ रूप से दर्ज करने का एक महत्वपूर्ण तरीका बना हुआ है1).
संक्रामक केराटाइटिस के प्रारंभिक मूल्यांकन में भी, फ्लोरेसीन स्टेनिंग कॉर्नियल एपिथेलियल डिफेक्ट्स की सीमा और आकार को समझने की मानक प्रक्रिया है, और इसे संक्रामक केराटाइटिस क्लिनिकल प्रैक्टिस गाइडलाइन (तीसरा संस्करण)2) के आधार पर देखभाल में शामिल किया जाता है.
कॉर्निया और कंजंक्टाइवा के एपिथेलियल नुकसान का वितरण और गंभीरता दिखाई देती है। फ्लोरेसीन में कॉर्नियल एपिथेलियम की पंक्टेट सुपरफिशियल केराटोपैथी (SPK) तथा क्षरण और अल्सर फ्लोरेसेंस के रूप में दिखाई देते हैं, और रोज़ बंगाल या लिसामिन ग्रीन में मृत और अपक्षयी कोशिकाओं का वितरण रंग जाता है। SPK के वितरण पैटर्न से कारणी रोग (सूखी आंख, दवा विषाक्तता, कॉन्टैक्ट लेंस से संबंधित चोट आदि) का अनुमान लगाया जा सकता है। स्कोरिंग विधियों से नुकसान को संख्यात्मक रूप से मापा जा सकता है और समय के साथ उपचार प्रभाव का आकलन किया जा सकता है.
फ्लोरेसीन सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली जीवित रंगाई की डाई है। यह आसानी से उपलब्ध होने, सुरक्षित होने और कम जलन पैदा करने के कारण व्यापक रूप से उपयोग की जाती है। फ्लोरेसीन एक डाई है जो नीली रोशनी (अधिकतम अवशोषण तरंगदैर्ध्य 494 nm) से उत्तेजित होने पर हरे रंग की फ्लोरेसेंस (521 nm) देती है। इसे केवल कोबाल्ट ब्लू फ़िल्टर से भी देखा जा सकता है, लेकिन यदि अवलोकन प्रणाली में ब्लू-फ्री फ़िल्टर जोड़ा जाए तो घाव अधिक स्पष्ट दिखते हैं।
रंगाई का सिद्धांत और देखने के बिंदु:
रंगाई की प्रक्रिया (न्यूनतम मात्रा विधि):
रोज़ बेंगाल, फ्लुओरेसीन से अलग तरीके से, नेत्र सतह को रंगता है।
रंगाई की विशेषताएँ:
van Bijsterveld स्कोरिंग (रोज़ बेंगाल और लिसामाइन ग्रीन दोनों के लिए):
लिसामिन ग्रीन रोज़ बेंगल के समान रंगाई गुणों वाला एक वैकल्पिक डाई है, लेकिन यह मरीजों के लिए कम जलन पैदा करता है।
रंगाई की विशेषताएँ:
फ्लुओरेसीन (fluorescein)
अवशोषण तरंगदैर्ध्य: 494 nm (नीली रोशनी) → फ्लोरेसेंस 521 nm (हरा)
रंगाई का लक्ष्य: उपकला कोशिकाओं के बीच टाइट जंक्शन टूटने वाले क्षेत्र (कोशिकाओं के बीच की जगह)
मुख्य उपयोग: SPK की पहचान, BUT मापन, कॉर्नियल अल्सर/इरोजन का मूल्यांकन
जलन: कम (सबसे आसानी से उपयोग होने वाला)
अवलोकन फ़िल्टर: कोबाल्ट ब्लू + नीला-रोधी (बैरियर) फ़िल्टर
रोज़ बेंगल
रंगाई का रंग: लाल
रंगाई के लक्ष्य: मृत कोशिकाएँ, अपक्षयी कोशिकाएँ, म्यूसिन-सुरक्षा से वंचित क्षेत्र
मुख्य उपयोग: Sjögren सिंड्रोम का निदान (van Bijsterveld स्कोर), ड्राई आई का मूल्यांकन
जलन: अधिक (बूंद डालते समय दर्द होता है)
देखने का फ़िल्टर: सफेद रोशनी या लाल फ़िल्टर
लिसामाइन ग्रीन
रंगाई का रंग: हरा
रंगाई के लक्ष्य: मृत कोशिकाएँ, अपक्षयी कोशिकाएँ (रोज़ बेंगल जैसी ही प्रक्रिया)
मुख्य उपयोग: रोज़ बेंगल का विकल्प। ड्राई आई और Sjögren सिंड्रोम का मूल्यांकन
जलन: कम (रोज़ बेंगल की तुलना में मरीज पर कम असर)
देखने का फ़िल्टर: लाल फ़िल्टर (560 nm या उससे अधिक) से स्पष्ट
| विशेषताएँ | फ्लोरेसीन | रोज़ बंगाल | लिसामाइन ग्रीन |
|---|---|---|---|
| रंगाई का रंग | हरा प्रतिदीप्ति | लाल | हरा |
| रंगाई का लक्ष्य | कोशिकाओं के बीच की जगहें (टाइट जंक्शन के टूटे हुए भाग) | मृत कोशिकाएँ, अपक्षयी कोशिकाएँ और म्यूकिन-रहित क्षेत्र | मृत कोशिकाएँ और अपक्षयी कोशिकाएँ |
| जलन | कम | अधिक (दर्द के साथ) | कम |
| अवलोकन फ़िल्टर | कोबाल्ट नीला + नीला हटाया हुआ | सफेद प्रकाश · लाल फ़िल्टर | लाल फ़िल्टर (560 nm या अधिक) |
| मुख्य उपयोग | SPK · BUT मापन · कॉर्नियल अल्सर | Sjögren निदान · ड्राई आई | रोज़ बेन्गल विकल्प |
| प्रतिनिधि स्कोर | Oxford स्कोर और NEI स्कोर | van Bijsterveld स्कोर | van Bijsterveld स्कोर |
दोनों मृत और अपक्षयी कोशिकाओं को रंगते हैं, लेकिन लिसामाइन ग्रीन कम चुभन पैदा करता है और मरीज के लिए अधिक आरामदायक होता है। रोज़ बेंगल डालने पर दर्द हो सकता है, इसलिए कुछ मामलों में टॉपिकल एनेस्थीसिया की जरूरत पड़ सकती है। हाल के वर्षों में लिसामाइन ग्रीन इन कमियों को दूर करने वाले वैकल्पिक डाई के रूप में अधिक इस्तेमाल किया जा रहा है। देखने के लिए लाल फ़िल्टर (560 nm या अधिक) का उपयोग करने से रंगे हुए क्षेत्र साफ़ दिखाई देते हैं.
कॉर्नियो-कंजंक्टाइवल एपिथेलियल क्षति को मात्रात्मक रूप से मापने के लिए कई स्कोरिंग प्रणालियाँ स्थापित की गई हैं.
| स्कोर विधि | मूल्यांकन क्षेत्र | स्कोर सीमा | कुल | मुख्य उपयोग |
|---|---|---|---|---|
| van Bijsterveld स्कोर | कॉर्निया, नासल बल्बर कंजंक्टाइवा, टेम्पोरल बल्बर कंजंक्टाइवा (3 क्षेत्र) | प्रत्येक 0–3 अंक | कुल 9 अंक (3.5 अंक या अधिक पर असामान्य) | Sjögren सिंड्रोम के निदान मानदंड |
| Oxford स्कोर | कॉर्निया, बल्बर कंजंक्टाइवा (नासल और टेम्पोरल) (3 क्षेत्र) | प्रत्येक 0–4 अंक (5 स्तर) | कुल 15 अंक | ड्राई आई की गंभीरता का आकलन |
| NEI/Industry Workshop स्कोर | कॉर्निया (5 खंड) | प्रत्येक 0–3 अंक | कुल 15 अंक | ड्राई आई पर क्लिनिकल अनुसंधान |
कॉर्निया, नासल बल्बर कंजंक्टाइवा और टेम्पोरल बल्बर कंजंक्टाइवा — इन 3 क्षेत्रों में से प्रत्येक का मूल्यांकन 0 से 3 के पैमाने पर किया जाता है (0: कोई रंगाई नहीं, 1: कुछ बिंदु-आकार की रंगाई, 2: आपस में मिलती हुई रंगाई, 3: व्यापक रंगाई)। कुल स्कोर 3.5 या उससे अधिक को असामान्य माना जाता है और Sjögren सिंड्रोम के निदान मानदंड के रूप में अंतरराष्ट्रीय स्तर पर अपनाया गया है3).
कॉर्निया और बल्बर कंजंक्टाइवा (नासल और टेम्पोरल) — इन 3 क्षेत्रों का अलग-अलग 0 से 4 अंक (5 स्तर) के अनुसार मूल्यांकन किया जाता है, जिससे कुल 15 अंक होते हैं। प्रत्येक स्तर का अर्ध-मात्रात्मक मूल्यांकन पैनल चित्रों से तुलना करके किया जाता है। इसका उपयोग ड्राई आई की गंभीरता और उपचार की प्रभावशीलता का आकलन करने में किया जाता है।
कॉर्निया को 5 खंडों में बाँटा जाता है: केंद्रीय, सुपरोनासल, सुपरोटेम्पोरल, इन्फरोनासल और इन्फरोटेम्पोरल, और प्रत्येक खंड का मूल्यांकन 0 से 3 अंक के रूप में किया जाता है, जिससे कुल 15 अंक होते हैं। यह नैदानिक शोध और बहु-केंद्रीय परीक्षणों में व्यापक रूप से उपयोग होता है।
ड्राई आई क्लिनिकल प्रैक्टिस गाइडलाइंस में कॉर्नियो-कंजंक्टाइवल एपिथीलियल क्षति के मानदंड (2006 संस्करण)1)：
2016 के ड्राई आई निदान मानदंडों में, एपिथीलियल क्षति अब निदान के लिए आवश्यक शर्त नहीं रही, लेकिन एपिथीलियल क्षति का अवलोकन ड्राई आई की गंभीरता के मूल्यांकन और उपचार प्रभाव के निर्धारण में अभी भी महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है1).
सूक्ष्म बिंदुवत सतही कॉर्नियल रोग (superficial punctate keratopathy: SPK) उन मरीजों में सबसे आम नेत्र-लक्षण है जो किसी बाहरी वस्तु के एहसास की शिकायत करते हैं। SPK किसी कारण से कॉर्निया की एपिथेलियल परत को हुए नुकसान का “परिणाम” है, यह कारण का निदान नहीं है। SPK का पता लगाने और उसके वितरण पैटर्न को समझने के लिए फ्लोरेसीन वाइटल स्टेनिंग आवश्यक है, और यह उन सूक्ष्म SPK को भी दिखा सकती है जो केवल स्लिट-लैम्प माइक्रोस्कोपी से नहीं दिखते।
जब SPK मिल जाए, तो उसके वितरण पैटर्न से कारण रोग का सक्रिय रूप से अनुमान लगाना महत्वपूर्ण है।
| वितरण पैटर्न | मुख्य कारण रोग |
|---|---|
| कॉर्निया के निचले 1/3 में केंद्रित | ड्राई आई (आंसू की कमी वाला प्रकार), एंट्रोपियन |
| कॉर्निया के ऊपरी 1/3 में केंद्रित | सुपीरियर लिम्बिक केराटोकंजंक्टिवाइटिस (SLK), ट्रेकोमा |
| पूरी कॉर्निया (विसरित) | औषधि-जनित विषाक्त केराटोपैथी, वायरल केराटाइटिस |
| 3 से 9 बजे की दिशा (क्षैतिज पट्टी) | कॉन्टैक्ट लेंस (3-9 o’clock स्टेनिंग) |
| कॉर्निया का केंद्र | लैगोफ्थाल्मोस, न्यूरोपैरालिटिक केराटाइटिस |
बहिर्जात SPK:
अंतर्जात SPK:
दवा-जनित विषाक्त केराटोपैथी में, कंजंक्टाइवल एपिथीलियम की क्षति कॉर्नियल एपिथीलियम की क्षति की तुलना में कम होती है। इस निष्कर्ष को फ्लोरेसीन स्टेनिंग से स्पष्ट रूप से पुष्टि किया जा सकता है और यह अन्य कारण वाली बीमारियों से अंतर करने में उपयोगी है। यदि पूरी कॉर्निया में फैली हुई SPK दिखाई दे, तो उपयोग की जा रही आई ड्रॉप्स (प्रिज़र्वेटिव, उच्च-सांद्रता दवाएँ, अमिनोग्लाइकोसाइड एंटीबायोटिक्स आदि) के प्रभाव पर विचार करना चाहिए2).
संक्रामक केराटाइटिस में, फ्लोरेसीन स्टेनिंग से कॉर्नियल एपिथीलियल दोष के आकार, क्षेत्रफल और गहराई (रंगाई की तीव्रता से आंका जाता है) का वस्तुनिष्ठ मूल्यांकन किया जा सकता है। अल्सर की सीमा और आकार उपचार चुनने और अनुवर्ती के लिए संकेतक के रूप में उपयोग किए जाते हैं2)। इसके अलावा, जीवाणुरोधी आई ड्रॉप्स (उच्च-सांद्रता तैयारियाँ, अमिनोग्लाइकोसाइड) कॉर्नियल एपिथीलियम में विषाक्तता पैदा कर सकती हैं, इसलिए उपचार के दौरान जीवित रंगाई से यह देखना महत्वपूर्ण है कि एपिथीलियल क्षति बढ़ तो नहीं रही है2).
SPK के वितरण पैटर्न को देखकर कारण रोग का अनुमान लगाया जा सकता है। कॉर्निया के निचले हिस्से में केंद्रित SPK ड्राई आई या एंट्रोपियन का संकेत देता है, ऊपरी SPK SLK या ट्रेकोमा का, और पूरे कॉर्निया में फैला हुआ SPK दवा-जनित विषाक्तता या वायरल केराटाइटिस का संकेत देता है। 3 बजे से 9 बजे की दिशा में SPK कॉन्टैक्ट लेंस चोट की विशेषता है, और कॉर्निया के केंद्र में SPK लागोफ्थैल्मोस और न्यूरोपैरालिटिक केराटाइटिस की विशेषता है। SPK केवल एपिथीलियल क्षति का “परिणाम” है, और वितरण पैटर्न को कारण खोजने के संकेत के रूप में उपयोग करना देखभाल का मुख्य बिंदु है।
जीवित रंगाई से पुष्टि की गई एपिथीलियल क्षति की वितरण और गंभीरता से कारण की पहचान करें, और कारण के अनुसार उपचार चुनें।
ड्राई आई क्लिनिकल प्रैक्टिस गाइडलाइन (2016 संस्करण) के आधार पर मानक उपचार इस प्रकार है1).
संक्रामक केराटाइटिस क्लिनिकल प्रैक्टिस गाइडलाइन (तीसरा संस्करण) के आधार पर, कारणी जीव की पहचान के बाद उपयुक्त एंटीमाइक्रोबियल चुना जाता है2).
फ्लोरेसीन एक फ्लोरोसेंट डाई है जो कोबाल्ट नीली रोशनी (494 nm) को अवशोषित करती है और हरी प्रतिदीप्ति (521 nm) उत्सर्जित करती है। प्रतिदीप्ति उत्सर्जन का सिद्धांत फोटोल्यूमिनेसेंस है, जिसमें अवशोषित ऊर्जा प्रकाश के रूप में फिर से निकलती है।
नीली रोशनी को रोकने वाला फ़िल्टर (बैरियर फ़िल्टर) उत्तेजना प्रकाश (लगभग 494 nm) को रोकता है और केवल फ्लोरेसेंस तरंगदैर्ध्य (521 nm) को पारित करता है। इससे पृष्ठभूमि प्रकाश हट जाता है और SPK की फ्लोरेसीन स्टेनिंग अधिक स्पष्ट दिखती है। जब स्लिट-लैम्प माइक्रोस्कोप पर नीली रोशनी को रोकने वाला फ़िल्टर लगाया जाता है, तो केवल कोबाल्ट ब्लू फ़िल्टर की तुलना में SPK का पता लगाने की संवेदनशीलता काफी बढ़ जाती है।
जब कॉर्नियल एपिथेलियम की टाइट जंक्शन टूट जाती हैं, तो फ्लोरेसीन कोशिकाओं के बीच की जगह में प्रवेश कर प्रतिदीप्ति देता है। जहाँ सामान्य टाइट जंक्शन बने रहते हैं, वहाँ फ्लोरेसीन नहीं जा पाता और रंगाई नहीं होती।
रोज़ बेंगल उन कोशिकाओं को चुनिंदा रूप से रंगता है जो म्यूसिन द्वारा सुरक्षित नहीं होतीं। स्वस्थ नेत्र-पृष्ठीय कोशिकाएँ म्यूसिन परत (मुख्यतः स्रावी म्यूसिन MUC5AC) से ढकी होती हैं, जो रोज़ बेंगल की रंगाई को रोकती है। मृत और अपक्षयी कोशिकाओं में यह म्यूसिन सुरक्षा नहीं रहती, इसलिए वे रंग जाती हैं। फ्लोरोसीन के विपरीत, यह मृत कोशिकाओं को ही रंगता है, इसलिए इसे नेत्र-पृष्ठीय कोशिका-जीवनीयता का सूचक माना जा सकता है।
लिसामिन ग्रीन, रोज़ बेंगल जैसी ही प्रक्रिया से मृत और अपक्षयी कोशिकाओं को रंगता है। लाल फ़िल्टर (560 nm या उससे अधिक) के साथ देखने पर रंगाई सबसे स्पष्ट दिखाई देती है। माना जाता है कि जीवित ऊतक में प्रवेश की क्षमता अलग होने के कारण यह रोज़ बेंगल की तुलना में नेत्र-पृष्ठ पर कम जलन पैदा करता है।
फ्लोरोसीन अवलोकन में नीला फ़िल्टर विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। फ़िल्टर के बिना कोबाल्ट ब्लू लाइट से भी घाव देखे जा सकते हैं, लेकिन नीला फ़िल्टर जोड़ने पर:
