Sediaan turunan darah adalah istilah umum untuk sediaan biologis yang diperoleh dengan sentrifugasi dan aktivasi darah manusia. Granula alfa trombosit mengandung faktor pertumbuhan turunan trombosit (PDGF), faktor pertumbuhan epidermal (EGF), faktor pertumbuhan fibroblas (FGF), faktor pertumbuhan transformasi (TGF), faktor pertumbuhan saraf (NGF), faktor pertumbuhan mirip insulin (IGF), dan lainnya. Molekul-molekul ini berinteraksi dengan reseptor di lingkungan mikro jaringan, menghasilkan pengurangan inflamasi dan percepatan penyembuhan luka.
Penggunaan sediaan turunan darah di bidang oftalmologi telah berkembang di area permukaan mata. Telah dilaporkan seri kasus di mana pompa irigasi mata portabel digunakan untuk memberikan serum atau plasma ke permukaan mata. Sejak itu, setelah pengenalan serum autologus, ditunjukkan bahwa trombosit merupakan kontributor utama regenerasi jaringan, sehingga mendorong pengembangan produk plasma kaya trombosit (PRP).
Tetes mata turunan darah diposisikan sebagai terapi baru yang meniru fungsi air mata alami dan meningkatkan konsentrasi faktor pertumbuhan aktif serta mediator 3). Serum autologus, serum tali pusat, dan plasma kaya trombosit (PRP) juga telah terbukti memberikan efek menguntungkan pada defek epitel kornea persisten 4).
Sediaan turunan darah digunakan untuk penyakit mata berikut. Sindrom mata kering sedang hingga berat merupakan indikasi paling umum, dan juga digunakan pada kasus berat yang terkait dengan sindrom Sjögren dan penyakit graft-versus-host (GVHD) 3). Defek epitel kornea persisten (PED) adalah salah satu indikasi utama karena suplai EGF konsentrasi tinggi berkontribusi pada regenerasi dan stabilisasi epitel. Keratitis neurotropik (NK), ulkus kornea/descemetocele, dan gangguan permukaan mata pasca operasi refraktif juga menjadi target terapi.
Pada GVHD kronis, 50-70% pasien transplantasi sumsum tulang mengalaminya, dan komplikasi mata yang paling sering adalah keratokonjungtivitis sicca (KCS) 1). Membran PRGF dan serum autologus digunakan untuk erosi kornea persisten dan penipisan kornea yang terkait dengan KCS berat 1).
Temuan tipikal pada pasien yang menjadi sasaran meliputi: pewarnaan fluoresein kornea positif, waktu pecah lapisan air mata (TBUT) yang memendek, nilai tes Schirmer yang rendah, hiperemia konjungtiva, dan defek epitel kornea yang persisten. Pada kasus berat, ditemukan ulkus kornea, penipisan kornea, dan peningkatan risiko perforasi.
Digunakan pada penyakit permukaan mata yang tidak memberikan respons yang memadai terhadap pengobatan konvensional, seperti mata kering sedang hingga berat yang resisten terhadap terapi standar dengan air mata buatan dan tetes siklosporin, defek epitel kornea persisten yang tidak sembuh dengan pengobatan biasa, keratitis neurotropik, dan ulkus kornea.
Serum autologus memiliki komposisi kompleks yang mirip dengan air mata alami. Air mata mengandung faktor pertumbuhan seperti EGF, NGF, TGF-α, faktor pertumbuhan keratinosit, IGF-1, serta vitamin A dan E, fibronektin, dan lebih dari 1500 jenis protein 3). Serum juga mengandung komponen-komponen ini, yang menghambat apoptosis dan mendorong proliferasi serta diferensiasi sel epitel 3).
Efek terapi plasma kaya trombosit (PRP) didasarkan pada pelepasan PDGF dan TGF-β dari granula alfa trombosit. Faktor-faktor ini menginduksi mitosis fibroblas dan sintesis kolagen, serta mendorong epitelisasi. PRGF adalah plasma kaya trombosit yang tidak mengandung leukosit, berbeda dari sediaan lain dalam hal mengurangi reaksi inflamasi.
PRGF memiliki efek anti-inflamasi, anti-fibrosis, bakteriostatik, dan anti-apoptosis 2). PRGF menghambat diferensiasi fibroblas stroma kornea menjadi miofibroblas, secara signifikan mengurangi pembentukan jaringan parut setelah penyembuhan luka 2). Studi in vitro dan in vivo menunjukkan hasil yang unggul dibandingkan serum autologus dalam penutupan luka kornea serta proliferasi dan migrasi sel epitel kornea 2).
Serum Autologus dan Serum Alogenik
Tetes mata serum autologus dibuat dari serum yang diperoleh dengan sentrifugasi darah lengkap pasien sendiri. Digunakan pada konsentrasi pengenceran 20-100%. Serum alogenik diperoleh dari darah donor sehat, menjadi alternatif bagi pasien yang sulit menjalani pengambilan darah sendiri 3).
Plasma Kaya Trombosit (PRP)
Antikoagulan (natrium sitrat) ditambahkan ke darah lengkap dan disentrifugasi untuk mengekstrak fraksi plasma yang kaya trombosit. Dilaporkan bahwa 87,5% pasien mengalami perbaikan skor OSDI dan 76,1% mengalami penurunan pewarnaan kornea 3).
Plasma Kaya Faktor Pertumbuhan (PRGF)
Merupakan subtipe PRP yang telah dihilangkan leukositnya. Aktivasi dengan kalsium klorida mengkatalisis jalur koagulasi, memungkinkan pelepasan faktor pertumbuhan dan pembentukan jaringan fibrin 2). Digunakan dalam bentuk tetes, gumpalan, dan membran.
| Sediaan | Poin Penting Metode Pembuatan | Karakteristik Utama |
|---|---|---|
| Serum autologus | Sentrifugasi → pengambilan serum | Komponen mirip air mata |
| PRP | Antikoagulan + sentrifugasi | Trombosit konsentrasi tinggi |
| PRGF | PRP + aktivasi Ca | Bebas leukosit |
| UCS | Dibuat dari darah tali pusat | Faktor pertumbuhan konsentrasi tinggi |
| FAB | Tusuk ujung jari | Sederhana dan biaya rendah |
Serum tali pusat (UCS) mengandung EGF, TGF-β, NGF, dan Substansi P yang lebih tinggi dibandingkan serum autologus 3). Stabil hingga 1 bulan pada suhu 4°C dan 3 bulan pada suhu -20°C 3). Sejumlah besar serum dapat dikumpulkan dari vena umbilikalis sekaligus, sehingga tidak perlu pengambilan darah berulang 3).
Dalam pembuatan membran PRGF, darah pasien disentrifugasi untuk memisahkan fraksi plasma, kemudian diaktivasi dengan kalsium klorida dan trombin 2). Inkubasi pada suhu tinggi mengubah fibrinogen larut menjadi membran fibrin tidak larut 2). Membran yang mengandung faktor pertumbuhan seperti EGF, PDGF-AB, TGF-β1, VEGF, IGF-I, dan FGF ini dijahit pada area defek jaringan 2).
PRP mengacu pada plasma yang diperkaya trombosit secara umum, dan mungkin mengandung leukosit. PRGF adalah subtipe PRP yang dihilangkan leukositnya dan diaktivasi dengan kalsium klorida. Karena tidak mengandung leukosit, PRGF menyebabkan lebih sedikit peradangan, kaya akan faktor pertumbuhan, dan memiliki konsentrasi molekul anti-inflamasi yang tinggi. Dapat digunakan dalam berbagai bentuk sediaan seperti tetes mata, gumpalan, dan membran fibrin.
Tinjauan Cochrane mengenai tetes mata serum autologus menunjukkan kemungkinan perbaikan gejala jangka pendek dibandingkan dengan pengganti air mata 3). Meta-analisis dari 7 RCT melaporkan efektivitas yang lebih tinggi dalam gejala dan beberapa temuan objektif 3). Gugus tugas EULAR merekomendasikan penggunaan tetes mata serum autologus pada kasus yang tidak terkontrol dengan baik dengan air mata buatan atau siklosporin 3).
Dalam seri kasus 368 pasien dengan tetes mata PRP, 87,5% menunjukkan perbaikan signifikan pada skor OSDI dan 76,1% menunjukkan penurunan pewarnaan kornea setelah pemberian 6 kali sehari selama 6 minggu 3). Pada 15 pasien sindrom Sjögren yang menerima injeksi PRP ke kelenjar lakrimal, penurunan pewarnaan kornea, peningkatan nilai Schirmer, dan perbaikan TBUT diamati pada semua pasien setelah 90 hari 3).
Serum Autologus vs PRP
Dalam RCT pada 96 pasien, tidak ditemukan perbedaan signifikan antara kedua kelompok dalam OSDI, TBUT, pewarnaan kornea, dan nilai Schirmer setelah 4 minggu pengobatan 3). PRP memiliki waktu persiapan yang lebih singkat dan merupakan alternatif yang berguna untuk sindrom Sjögren 3).
Efek PRGF
Dalam studi retrospektif multisenter pada 61 pasien DED, gangguan epitel kornea dan gejala subjektif membaik secara signifikan setelah 3 bulan penggunaan tetes mata PRGF, dan pewarnaan kornea membaik pada 74,3% 3). Perbaikan morfologi pleksus saraf kornea juga diamati pada kelompok perawatan PRGF 3).
Dalam meta-analisis jaringan, lisat trombosit atau PRP memperbaiki OSDI dan pewarnaan kornea lebih baik daripada serum autologus, namun kepastian bukti dinilai “rendah” 3).
Tetesan serum digunakan pada 40 kasus defek epitel kornea persisten yang tidak sembuh setelah transplantasi membran amnion, dan dilaporkan memperbaiki penyembuhan dan pemulihan penglihatan dibandingkan dengan air mata buatan 3). PRGF merupakan pilihan yang aman dan efektif untuk keratitis neurotropik stadium 2-3, menunjukkan tingkat penyembuhan tinggi dalam waktu singkat. Pada ulkus kornea, membran PRGF digunakan sendiri atau dikombinasikan dengan membran amnion.
Penggunaan membran PRGF untuk dellen kornea (pada anak) menunjukkan membran terserap dalam 3 minggu pasca operasi, dan dellen menghilang setelah 1 bulan 2). Pada KCS berat terkait cGVHD, dilaporkan penggunaan transplantasi kornea lapisan penuh atau membran PRGF, namun terdapat kasus refrakter dengan degenerasi kornea kalsifik berat 1).
Plasma kaya trombosit autolog (A-PRP) telah digunakan sejak 1995 dalam perawatan bedah lubang makula idiopatik. Pada lubang makula yang sangat besar, diduga meningkatkan proliferasi glial dan memastikan penutupan lubang. Hasil awal injeksi A-PRP sub-Tenon pada retinitis pigmentosa menunjukkan perbaikan signifikan dalam fungsi visual dan nilai elektroretinografi multifokal.
Tetesan PRGF dapat disimpan beku hingga 12 bulan tanpa mengurangi faktor pertumbuhan dan protein utama. Aktivitas biologisnya dipertahankan selama 3-7 hari pada suhu 4°C atau suhu kamar. Serum tali pusat stabil hingga 1 bulan pada suhu 4°C dan 3 bulan pada -20°C. Tetesan PRGF beku-kering mempertahankan karakteristiknya setidaknya 3 bulan pada suhu kamar atau 4°C.
Efek terapi produk turunan darah didasarkan pada mekanisme multi-lapis. Faktor pertumbuhan yang dilepaskan dari granula alfa trombosit seperti PDGF, EGF, FGF, TGF-β, NGF, dan IGF berikatan dengan reseptor permukaan sel, mengaktifkan jalur transduksi sinyal yang terlibat dalam proliferasi, migrasi, dan diferensiasi.
Fibrin menjembatani celah jaringan dan berfungsi sebagai perancah untuk proliferasi dan migrasi sel 2). Membran PRGF memanfaatkan efek jembatan fibrin ini dalam pengobatan ulkus kornea dalam dan sebagai perekat biologis dalam transplantasi kornea lamellar pada studi praklinis 2).
Mekanisme unik PRGF adalah karena tidak mengandung leukosit, pelepasan sitokin inflamasi ditekan. Ini mencegah diferensiasi fibroblas stroma kornea menjadi miofibroblas, secara signifikan menghambat pembentukan jaringan parut dan kekeruhan 2). Selain itu, efek bakteriostatik PRGF memberikan perlindungan terhadap bakteri Gram-positif.
PRGF telah terbukti secara in vitro mengurangi sitotoksisitas pada sel epitel pigmen retina (RPE) di bawah kondisi stres oksidatif, mempertahankan aktivitas mitokondria dan viabilitas sel.
Laporan TFOS DEWS III menempatkan tetes mata yang berasal dari darah sebagai pendekatan baru dalam pengobatan mata kering, dengan bukti efektivitas dari RCT dan meta-analisis yang dirangkum 3). Baik serum autologus maupun serum homolog menunjukkan perbaikan gejala dan tanda objektif, namun standarisasi metode preparasi dan perluasan penggunaan masih menjadi tantangan 3).
Darah autologus tusuk jari (FAB) merupakan metode inovatif yang menarik perhatian 3). Dalam RCT multisenter, aplikasi FAB 4 kali sehari selain terapi konvensional secara signifikan memperbaiki skor OSDI 3). Seri kasus prospektif pada 16 pasien juga melaporkan perbaikan pewarnaan kornea, TBUT, ketajaman penglihatan, dan kenyamanan mata 3). Metode ini ramah pasien dan berbiaya rendah, namun efeknya berkurang 4 minggu setelah penghentian terapi, yang menjadi tantangan 3).
Di bidang bedah refraktif, PRGF terbukti menginduksi regenerasi saraf setelah LASIK sehingga menekan timbulnya mata kering, dan merangsang penyembuhan luka kornea setelah PRK sehingga mengurangi pembentukan haze. Ke depannya, diperlukan standarisasi protokol preparasi secara internasional, RCT skala besar dengan follow-up jangka panjang, dan penetapan sistem klasifikasi untuk sediaan trombosit.
Metode ini melibatkan penusukan ujung jari untuk mengambil sedikit darah utuh autologus dan mengaplikasikannya langsung ke permukaan mata. Keuntungannya adalah tidak memerlukan preparasi rumit seperti pengambilan darah atau sentrifugasi, dan dapat dilakukan sendiri oleh pasien dengan mudah. RCT multisenter telah mengkonfirmasi efek tambahannya pada terapi konvensional, namun efeknya berkurang setelah penghentian, sehingga diperlukan penggunaan terus-menerus.
