Test delle IgE totali nelle lacrime e degli anticorpi contro gli allergeni (kit per esame del sangue per allergie)
1. Che cosa sono l’IgE totale nelle lacrime e i test degli anticorpi contro gli allergeni?
Sezione intitolata “1. Che cosa sono l’IgE totale nelle lacrime e i test degli anticorpi contro gli allergeni?”La diagnosi delle malattie congiuntivali allergiche è classificata in tre fasi secondo la Linea guida di pratica clinica delle malattie congiuntivali allergiche (3ª edizione)1).
| Livello diagnostico | Reperti richiesti |
|---|---|
| Diagnosi clinica | Solo reperti clinici |
| Diagnosi clinica definitiva | Reperti clinici + predisposizione allergica (IgE totale nelle lacrime, test cutaneo, IgE sieriche specifiche per allergene) |
| Diagnosi definitiva | Reperti clinici + reazione allergica locale oculare (test degli eosinofili) |
In questo articolo, “dosaggio dell’IgE totale nelle lacrime e degli anticorpi contro gli allergeni” è il termine generico per il gruppo di esami che supporta questo sistema diagnostico. Il dosaggio dell’IgE totale nelle lacrime può confermare rapidamente, nello stesso giorno e in ambulatorio, la predisposizione allergica locale dell’occhio, ed è usato per la diagnosi clinica definitiva. Il dosaggio delle IgE sieriche specifiche per allergene e il test cutaneo sono usati per confermare la predisposizione allergica sistemica e identificare l’allergene responsabile. La diagnosi definitiva richiede un test degli eosinofili su striscio da scraping congiuntivale.
La malattia congiuntivale allergica ha un’elevata prevalenza, soprattutto in relazione alla rinite allergica da polline di cedro, e un’indagine del 2017 ha rilevato malattia congiuntivale allergica in circa il 15–20% dei pazienti che si sono rivolti a strutture oftalmologiche in tutto il Paese3). La scelta appropriata degli esami e la comprensione del sistema diagnostico portano a una classificazione e a un trattamento accurati.
Può determinare nello stesso giorno, in ambulatorio, la presenza o l’assenza di una predisposizione allergica locale dell’occhio. Alerwatch Tear IgE è un kit diagnostico rapido che utilizza l’immunocromatografia e, se il risultato è positivo o debolmente positivo, la diagnosi è “presenza di predisposizione allergica locale dell’occhio”. Insieme ai reperti clinici, aiuta la diagnosi clinica definitiva. Per la diagnosi definitiva è necessario separatamente un test degli eosinofili.
2. Dosaggio dell’IgE totale nelle lacrime (Alerwatch)
Sezione intitolata “2. Dosaggio dell’IgE totale nelle lacrime (Alerwatch)”
Kit di test e principio
Sezione intitolata “Kit di test e principio”L’IgE totale lacrimale viene valutata con un kit diagnostico rapido basato su immunocromatografia (Allerwatch Tear IgE, Wakamoto Pharmaceutical / Minaris Medical). Nell’immunocromatografia, l’IgE presente nelle lacrime si lega all’anticorpo anti-IgE umano marcato con oro colloidale sulla striscia e viene catturato dall’anticorpo immobilizzato sulla linea di test per capillarità, formando una linea colorata.
Procedura del test
Sezione intitolata “Procedura del test”- Inserire la striscia reattiva nel sacco congiuntivale della palpebra inferiore per raccogliere le lacrime
- Aprire la striscia reattiva
- Leggere visivamente la linea di test e la linea di controllo e determinare il risultato
Interpretazione del risultato
Sezione intitolata “Interpretazione del risultato”I risultati sono valutati in quattro categorie: positivo, debolmente positivo, negativo e non determinabile. In caso di risultato positivo o debolmente positivo, si diagnostica una «predisposizione allergica locale oculare».
Tasso di positività per tipo di malattia
Sezione intitolata “Tasso di positività per tipo di malattia”Di seguito sono mostrati i tassi di positività dell’IgE totale lacrimale per tipo di malattia2).
| Tipo di malattia | Tasso di positività (numero di casi positivi / numero totale di casi) |
|---|---|
| SAC (congiuntivite allergica stagionale) | 61.9%（52/84） |
| PAC (congiuntivite allergica perenne) | 65.4%（34/52） |
| AKC (cheratocongiuntivite atopica) | 80.5%（33/41） |
| VKC (cheratocongiuntivite primaverile) | 94.7%（36/38） |
| GPC (congiuntivite papillare gigante) | 75.0%（6/8） |
| Totale | 72.2%（161/223） |
Nel SAC/PAC il tasso di positività si ferma al 60–65%, quindi il tasso di falsi negativi raggiunge circa il 35–38%. Anche se il test IgE nelle lacrime è negativo, è importante formulare una diagnosi complessiva insieme ai reperti clinici2).
Sì. Nel SAC (congiuntivite allergica stagionale) e nel PAC (congiuntivite allergica perenne), il tasso di positività è di circa il 60–65% e i falsi negativi si verificano in circa il 35–38% dei casi. Poiché la diagnosi basata solo sul test IgE nelle lacrime ha dei limiti, è importante valutarla in modo complessivo insieme ai reperti clinici (arrossamento delle palpebre e della congiuntiva, ipertrofia papillare, prurito, ecc.) e all’IgE sierica specifica per antigene.
3. Test del titolo di IgE sierica specifica per antigene
Sezione intitolata “3. Test del titolo di IgE sierica specifica per antigene”Metodo di esame
Sezione intitolata “Metodo di esame”Si effettua un prelievo di sangue e si analizzano in vitro gli anticorpi IgE specifici per antigene nel sangue. Il test serve a confermare la predisposizione allergica sistemica e a identificare l’antigene causale.
Gli elementi da esaminare vengono selezionati tra acari della polvere, polvere domestica, cedro, orchard grass, timothy e altri allergeni che mostrano un’alta positività nei pazienti con malattie allergiche della congiuntiva. La copertura assicurativa si applica fino a 13 elementi per volta.
Test di screening
Sezione intitolata “Test di screening”Sono disponibili i seguenti test come screening, in grado di misurare più elementi contemporaneamente.
- View Allergy 39 (Thermo Fisher Diagnostics): può misurare 39 elementi contemporaneamente. Coperto dall’assicurazione
- Mast Immunosystems V (Minaris Medical): consente la misurazione simultanea di più elementi. Coperto dall’assicurazione
Questi test sono utili come screening nei casi alla prima visita in cui l’antigene causale non è ancora stato ristretto.
Interpretazione dei risultati
Sezione intitolata “Interpretazione dei risultati”Se un qualsiasi elemento mostra un titolo positivo di IgE specifiche per l’antigene nel siero, viene diagnosticata una predisposizione allergica sistemica. Gli anticorpi IgE specifici per l’antigene indicano a quali antigeni il paziente è stato sensibilizzato, ma l’antigene causale va determinato considerando sia il titolo anticorpale sia i sintomi clinici (come il peggioramento durante la stagione dei pollini e il rapporto con l’ambiente interno).
Se l’antigene a cui è stata confermata la sensibilizzazione non corrisponde ai sintomi reali, occorre considerare la possibilità di sensibilizzazione a più antigeni o di una riduzione del titolo anticorpale dovuta a una sensibilizzazione di lunga durata.
4. Test cutanei (prick test e scratch test)
Sezione intitolata “4. Test cutanei (prick test e scratch test)”Esistono due tipi di test cutanei per le reazioni allergiche immediate: il prick test e lo scratch test. Per gli antigeni da testare, si selezionano diversi antigeni sospettati in base ai sintomi clinici e si esegue l’esame. Durante il test è importante eseguire contemporaneamente il controllo positivo (per verificare i falsi negativi) e il controllo negativo (per confermare che non si tratti di orticaria meccanica).
- Prick test: si applica la soluzione dell’allergene sulla superficie flessoria dell’avambraccio e si introduce l’antigene pungendo la pelle con un ago dedicato
- Scratch test: si pratica un lieve graffio sulla pelle con uno strumento dedicato, quindi si applica la soluzione dell’allergene in modo che penetri nella pelle
Criteri di valutazione
Sezione intitolata “Criteri di valutazione”Si usa come misura della reazione il diametro maggiore del pomfo e la media tra questo e il diametro perpendicolare passante per il suo punto medio. Un pomfo di 3 mm o più, oppure una reazione pari ad almeno la metà del pomfo del controllo positivo, è considerato positivo. La valutazione si esegue di solito dopo 15–20 minuti.
Controindicazioni e precauzioni
Sezione intitolata “Controindicazioni e precauzioni”Gli antagonisti dei recettori H₁ dell’istamina (antistaminici) e gli antidepressivi triciclici possono influenzare i risultati del test cutaneo. Nei pazienti che assumono questi farmaci, prevedere un periodo di sospensione prima dell’esame o passare a un test sierologico per IgE specifiche per allergeni.
Eseguire contemporaneamente un controllo positivo e uno negativo per confermare l’affidabilità dell’esame. Nei pazienti con asma bronchiale non controllato o a rischio di anafilassi, valutare con cautela se eseguire il test e considerare il passaggio a un test sierologico per IgE. Poiché antistaminici e antidepressivi triciclici influenzano i risultati, è essenziale verificare i farmaci prima dell’esame.
5. Confronto degli esami e loro utilizzo
Sezione intitolata “5. Confronto degli esami e loro utilizzo”Confronto delle caratteristiche dei 4 esami
Sezione intitolata “Confronto delle caratteristiche dei 4 esami”| Esame | Oggetto di valutazione | Sensibilità nel VKC | Copertura assicurativa | Caratteristiche |
|---|---|---|---|---|
| IgE totale nelle lacrime (Allerwatch) | Predisposizione allergica locale oculare | 94.7% | Sì, semplice | Può essere determinato lo stesso giorno in ambulatorio |
| IgE sierica specifica per allergeni | Predisposizione allergica sistemica e identificazione dell’antigene responsabile | — | Sì (fino a 13 voci) | Utile per identificare l’antigene responsabile |
| Test cutaneo | Predisposizione allergica sistemica | — | Sì | Rischio di anafilassi |
| Test degli eosinofili | Reazione allergica locale oculare | — | sì | indispensabile per la diagnosi definitiva |
Percorso diagnostico nella pratica clinica
Sezione intitolata “Percorso diagnostico nella pratica clinica”Di seguito è riportato il percorso di base degli esami nella pratica clinica1).
- Sospettare un’allergia dai reperti clinici (diagnosi clinica): verificare reperti come prurito, arrossamento e iperplasia papillare
- Confermare la predisposizione allergica (diagnosi clinica definitiva): confermare la predisposizione con IgE lacrimali o IgE sieriche specifiche per allergene. Se si desidera identificare l’allergene causale, l’IgE sierica è utile
- Eseguire la diagnosi definitiva quando necessario (diagnosi definitiva): confermare la reazione allergica locale oculare con il test degli eosinofili
Il test delle IgE lacrimali è vantaggioso perché consente una valutazione in giornata in ambulatorio, ma occorre prestare attenzione ai falsi negativi in SAC/PAC. Se il test cutaneo è difficile da eseguire per il rischio di anafilassi o per altri motivi, si passa al test delle IgE sieriche specifiche per allergene.
6. Principi dettagliati del test e test degli eosinofili
Sezione intitolata “6. Principi dettagliati del test e test degli eosinofili”IgE e la reazione allergica immediata
Sezione intitolata “IgE e la reazione allergica immediata”L’IgE è l’immunoglobulina centrale nella reazione allergica immediata (di tipo I). Si lega, tramite il recettore ad alta affinità per IgE (FcεRI), sulla superficie di mastociti e basofili sensibilizzati. Quando l’antigene entra di nuovo, l’IgE si reticola, si verifica la degranulazione e vengono rilasciati mediatori infiammatori come istamina e leucotrieni.
Nell’occhio, nella congiuntiva sono presenti molti mastociti e questa reazione causa sintomi allergici come arrossamento, prurito e lacrimazione. Il livello totale di IgE nelle lacrime riflette il grado di sensibilizzazione locale oculare.
Principio dell’immunocromatografia
Sezione intitolata “Principio dell’immunocromatografia”Il principio del metodo immunocromatografico usato per AllerWatch IgE lacrimale è il seguente.
- L’IgE presente nelle lacrime si lega all’anticorpo anti-IgE umano marcato con oro colloidale sulla striscia
- Si sposta lungo la striscia per capillarità
- L’anticorpo immobilizzato sulla linea di test cattura l’IgE, formando una linea colorata
- Quando l’IgE è presente oltre una certa quantità, la linea colorata diventa visibile e il risultato viene giudicato positivo
Metodi di misurazione dell’IgE sierica
Sezione intitolata “Metodi di misurazione dell’IgE sierica”Per misurare l’IgE specifica per antigene nel siero si usano i seguenti metodi.
- Metodo ImmunoCAP (immunodosaggio enzimatico fluorescente): il metodo quantitativo più diffuso. È possibile una misurazione ad alta sensibilità con un campione minimo
- Metodo MAST (metodo CAP-RAST): metodo di rilevamento che utilizza un allergene immobilizzato
- I valori quantitativi sono espressi in UA/mL (o kU/L), e spesso 0,35 kU/L o più viene considerato positivo
Esame degli eosinofili (diagnosi definitiva)
Sezione intitolata “Esame degli eosinofili (diagnosi definitiva)”L’esame degli eosinofili consiste nel colorare con la colorazione di Hansel un campione di striscio da raschiamento congiuntivale e nel verificare al microscopio ottico la presenza o l’assenza di eosinofili nello striscio. Se anche un solo eosinofilo viene confermato al microscopio, il risultato è considerato positivo e la malattia congiuntivale allergica viene diagnosticata in modo definitivo.
Se durante il prelievo del campione si osserva sanguinamento, è possibile che cellule del sangue si siano mescolate al campione; pertanto, per la valutazione, l’esame va ripetuto nell’altro occhio.
Gli eosinofili vengono rilevati più spesso nei casi gravi (VKC・AKC) e possono non essere rilevati in SAC/PAC. Si usa quando è necessaria una diagnosi definitiva o una valutazione oggettiva della gravità.
7. Ricerche più recenti e prospettive future
Sezione intitolata “7. Ricerche più recenti e prospettive future”Misurazione delle IgE specifiche per antigene nelle lacrime
Sezione intitolata “Misurazione delle IgE specifiche per antigene nelle lacrime”Sono in corso ricerca e sviluppo di kit per misurare le IgE specifiche nelle lacrime (ad esempio, le IgE specifiche per il cedro). Se, oltre alle IgE totali nelle lacrime, si riuscisse a identificare direttamente l’allergene sensibilizzante locale dell’occhio, sarebbe possibile diagnosticare l’allergene causale nello stesso giorno in ambulatorio senza prelievo di sangue. Al momento, è ancora in fase di ricerca.
Valutazione della gravità mediante biomarcatori
Sezione intitolata “Valutazione della gravità mediante biomarcatori”Sono in studio biomarcatori nel liquido lacrimale come periostina, eotassina e TARC (CCL17) per il loro possibile impiego nella valutazione della gravità. In particolare, la periostina sta attirando attenzione come indicatore dell’infiammazione Th2, e si è suggerito che possa riflettere l’attività di malattia nella VKC e nella AKC4).
Monitoraggio del titolo anticorpale nell’immunoterapia con allergeni
Sezione intitolata “Monitoraggio del titolo anticorpale nell’immunoterapia con allergeni”Sono in corso studi sul monitoraggio delle variazioni del titolo di anticorpi IgE specifici nel siero per valutare l’efficacia dell’immunoterapia sublinguale e dell’immunoterapia sottocutanea per l’allergia ai pollini di cedro5). È stato riportato che il titolo degli anticorpi IgE aumenta temporaneamente e poi diminuisce dopo l’immunoterapia, e si sta valutando anche l’applicazione al monitoraggio delle IgE nelle lacrime.
Test allergologici nei bambini
Sezione intitolata “Test allergologici nei bambini”Nelle malattie congiuntivali allergiche pediatriche, in particolare la VKC, l’esecuzione dei test cutanei può essere difficile, e le IgE nelle lacrime e le IgE sieriche sono utili. Sono necessarie valutazioni su larga scala della sensibilità e della specificità di ciascun test nei bambini, nonché ricerche sulle procedure di test raccomandate6).
8. Riferimenti
Sezione intitolata “8. Riferimenti”- 日本眼科アレルギー学会診療ガイドライン作成委員会. アレルギー性結膜疾患診療ガイドライン（第3版）. 日眼会誌. 2021;125(8):741-785.
- 庄司純, 内尾英一, 海老原伸行, 大橋裕一, 大野重昭, 岡本茂樹, 他. アレルギー性結膜疾患診断における自覚症状，他覚所見および涙液総IgE検査キットの有用性の検討. 日眼会誌. 2012;116(5):485-493. http://journal.nichigan.or.jp/Disp?mag=0&number=5&start=485&style=abst&vol=116&year=2012.
- 岡本茂樹, 内尾英一, 海老原伸行, 他. 2017年度日本眼科アレルギー学会アレルギー性結膜疾患実態調査. 日眼会誌. 2022;126(7):625-635.
- Fujishima H, Okada N, Matsumoto K, Fukagawa K, Igarashi A, Matsuda A, Ono J, Ohta S, Mukai H, Yoshikawa M, Izuhara K. The usefulness of measuring tear periostin for the diagnosis and management of ocular allergic diseases. J Allergy Clin Immunol. 2016;138(2):459-467.e2. doi:10.1016/j.jaci.2015.11.039.
- 鈴木茂伸, 堀口裕正, 遠藤昌夫. スギ花粉症の舌下免疫療法とアレルゲン特異的IgE抗体価の推移. アレルギー. 2018;67(6):704-711.
- Leonardi A, Bogacka E, Fauquert JL, Kowalski ML, Groblewska A, Jedrzejczak-Czechowicz M, et al. Ocular allergy: recognizing and diagnosing hypersensitivity disorders of the ocular surface. Allergy. 2012;67(11):1327-37. doi:10.1111/all.12009. PMID:22947083.