Анализ общего IgE в слезной жидкости и антител к аллергенам (набор для анализа крови на аллергию)

Основные моменты этого заболевания

• Диагностика аллергических заболеваний конъюнктивы делится на три этапа: клинический диагноз, клинически подтверждённый диагноз и окончательный диагноз
• Тест на общий IgE в слезе (Allerwatch) — это экспресс-набор для диагностики, использующий иммуннохроматографический метод, и результат можно получить в тот же день в амбулаторных условиях
• Частота положительного результата по IgE в слезе при весеннем кератоконъюнктивите (VKC) высокая — 94,7 %, тогда как при сезонном и круглогодичном аллергическом конъюнктивите она составляет лишь 60–65 %, поэтому нужно учитывать возможность ложноотрицательных результатов
• Анализ сывороточных антител IgE к конкретному антигену полезен для подтверждения общей аллергической предрасположенности и выявления причинного антигена; по страховке покрывается до 13 пунктов
• Кожные пробы (прик-тест и скарификационный тест) связаны с риском анафилаксии, поэтому перед их проведением необходимо проверить противопоказания
• Исследование эозинофилов (окраска Хансела) необходимо для окончательного диагноза, и обнаружение даже одного эозинофила считается положительным результатом
• Эти четыре исследования имеют разные цели, поэтому важно использовать их в соответствии с уровнем диагностики

1. Что такое общий IgE в слезе и тесты на антитела к аллергенам?

Диагностика аллергических заболеваний конъюнктивы разделяется на три этапа согласно Руководству по клинической практике при аллергических заболеваниях конъюнктивы (3-е издание)¹⁾.

Уровень диагностики	Необходимые находки
Клинический диагноз	Только клинические признаки
Клинически подтверждённый диагноз	Клинические признаки + аллергическая предрасположенность (общий IgE в слезе, кожная проба, сывороточный аллерген-специфический IgE)
Подтверждённый диагноз	Клинические признаки + местная аллергическая реакция в глазу (тест на эозинофилы)

В этой статье под «анализом общего IgE в слезе и антител к аллергенам» понимается общее название группы исследований, поддерживающих эту диагностическую систему. Анализ общего IgE в слезе позволяет быстро, в тот же день, подтвердить местную аллергическую предрасположенность глаза в амбулаторных условиях и используется для клинически подтверждённого диагноза. Анализ сывороточного аллерген-специфического IgE и кожная проба используются для подтверждения общей аллергической предрасположенности и выявления причинного аллергена. Для подтверждённого диагноза требуется тест на эозинофилы в мазке-отпечатке со соскоба конъюнктивы.

Аллергические заболевания конъюнктивы широко распространены, особенно связанные с сенной лихорадкой на пыльцу кедра, и по данным обследования 2017 года аллергические заболевания конъюнктивы были выявлены примерно у 15–20% пациентов, обратившихся в офтальмологические учреждения по всей стране³⁾. Правильный выбор исследований и понимание диагностической системы ведут к точной классификации и лечению.

Q Что показывает тест на IgE в слезе?

A

Он позволяет в тот же день в амбулатории определить наличие или отсутствие местной аллергической предрасположенности глаза. Alerwatch Tear IgE — это экспресс-тест на основе иммунохроматографии, и при положительном или слабоположительном результате диагноз формулируется как «есть местная аллергическая предрасположенность глаза». В сочетании с клиническими признаками он помогает поставить клинически подтверждённый диагноз. Для подтверждённого диагноза отдельно требуется тест на эозинофилы.

2. Анализ общего IgE в слезе (Alerwatch)

Inada N, Ishimori A, Shoji J. CCL20/MIP-3 alpha mRNA expression in the conjunctival epithelium of normal individuals and patients with vernal keratoconjunctivitis. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2014;252(12):1977-1984. Figure 2. PMCID: PMC4245489. License: CC BY.

При тяжелой весенней кератоконъюнктивите (VKC) конъюнктива верхнего века имеет вид брусчатки (cobblestone) из-за плотного скопления крупных сосочков. Это соответствует высокой частоте положительного результата по IgE в слезе (94,7%) при весенней кератоконъюнктивите, описанной в разделе «Определение общего IgE в слезе (Allerwatch)».

Набор для теста и принцип

Общий IgE в слезе исследуют с помощью экспресс-набора на основе иммунохроматографии (Allerwatch Tear IgE, Wakamoto Pharmaceutical / Minaris Medical). В иммунохроматографии IgE в слезной жидкости связывается с мечеными коллоидным золотом античеловеческими антителами к IgE на полоске и капиллярным путем захватывается иммобилизованным антителом на тестовой линии, в результате чего образуется окрашенная линия.

Порядок проведения теста

1. Ввести тест-полоску в нижний конъюнктивальный мешок для сбора слезы
2. Развернуть тест-полоску
3. Визуально считать тестовую и контрольную линии и определить результат

Интерпретация результатов

Результаты оценивают по четырем категориям: положительный, слабоположительный, отрицательный и неопределенный. При положительном или слабоположительном результате диагностируют «наличие местной аллергической предрасположенности в глазу».

Частота положительных результатов по типу заболевания

Ниже приведены частоты положительных результатов по общему IgE в слезе в зависимости от типа заболевания²⁾.

Тип заболевания	Частота положительных результатов (число положительных случаев / общее число случаев)
SAC (сезонный аллергический конъюнктивит)	61.9%（52/84）
PAC (круглогодичный аллергический конъюнктивит)	65.4%（34/52）
AKC (атопический кератоконъюнктивит)	80.5%（33/41）
VKC (весенний кератоконъюнктивит)	94.7%（36/38）
GPC (гигантский папиллярный конъюнктивит)	75.0%（6/8）
Всего	72.2%（161/223）

При SAC/PAC доля положительных результатов составляет лишь 60–65%, поэтому частота ложноотрицательных результатов достигает примерно 35–38%. Даже если IgE в слезной жидкости отрицателен, важно ставить диагноз комплексно вместе с клиническими признаками²⁾.

Q Может ли быть аллергический конъюнктивит, если тест IgE в слезной жидкости отрицательный?

A

Да. При SAC (сезонный аллергический конъюнктивит) и PAC (круглогодичный аллергический конъюнктивит) доля положительных результатов составляет примерно 60–65%, а ложноотрицательные результаты встречаются примерно в 35–38% случаев. Поскольку диагноз только по тесту IgE в слезной жидкости имеет ограничения, важно комплексно оценивать клинические признаки (покраснение век и конъюнктивы, папиллярная гипертрофия, зуд и т. д.) и сывороточный специфический IgE к аллергену.

3. Исследование титра сывороточного аллерген-специфического IgE

Метод исследования

Берут кровь и in vitro определяют аллерген-специфические IgE-антитела в крови. Исследование используют для подтверждения общей аллергической предрасположенности и идентификации причинного аллергена.

Для исследования выбирают клещей домашней пыли, домашнюю пыль, кедр, овсяницу садовую, тимофеевку и другие аллергены, у которых у пациентов с аллергическими заболеваниями конъюнктивы часто бывают положительные результаты. Страховое покрытие распространяется максимум на 13 показателей за одно исследование.

Скрининговое исследование

В качестве скрининга доступны следующие тесты, позволяющие одновременно измерять несколько показателей.

• View Allergy 39 (Thermo Fisher Diagnostics): позволяет одновременно измерять 39 показателей. Страховое покрытие
• Mast Immunosystems V (Minaris Medical): позволяет одновременно измерять несколько показателей. Страховое покрытие

Эти тесты полезны для скрининга у пациентов при первом обращении, когда причинный аллерген еще не был сужен.

Интерпретация результатов

Если хотя бы один показатель титра антиген-специфических IgE-антител в сыворотке положительный, это диагностируют как наличие системной аллергической предрасположенности. Антиген-специфические IgE-антитела показывают, к каким антигенам пациент сенсибилизирован, но причинный антиген следует определять, учитывая как титр антител, так и клинические симптомы (например, усиление симптомов в сезон пыления, связь с условиями в помещении).

Если подтвержденный антиген сенсибилизации не совпадает с реальными симптомами, следует учитывать возможность сенсибилизации к нескольким антигенам или снижения титра антител из-за длительной сенсибилизации.

4. Кожные пробы (prick-тест и scratch-тест)

Метод

Для оценки немедленной аллергической реакции существуют два вида кожных проб: prick-тест и scratch-тест. В качестве тестируемых антигенов выбирают несколько антигенов, подозреваемых по клиническим симптомам, и проводят исследование. При исследовании важно одновременно выполнить положительный контроль (для проверки ложноотрицательных результатов) и отрицательный контроль (для подтверждения, что это не механическая крапивница).

• Prick-тест: на кожу сгибательной поверхности предплечья наносят каплю раствора аллергена и специальной иглой прокалывают кожу, чтобы ввести антиген
• Scratch-тест: специальным инструментом на коже делают поверхностную царапину, затем наносят раствор аллергена, чтобы он проник в кожу

Критерии оценки

Размер реакции определяют по наибольшему диаметру волдыря и среднему значению между ним и перпендикулярным диаметром через его середину. Волдырь диаметром 3 мм или более, либо реакция не менее половины волдыря при положительном контроле, оценивается как положительная. Оценку обычно проводят через 15–20 минут.

Противопоказания и меры предосторожности

Меры предосторожности перед проведением кожных проб

Кожные пробы могут вызвать аллергические симптомы во время исследования. У пациентов, относящихся к следующим группам, следует осторожно рассмотреть проведение или перейти на анализ сывороточного IgE к конкретному аллергену.

• Пациенты с плохо контролируемой бронхиальной астмой
• Пациенты, у которых анафилаксия может развиться даже при небольшом количестве аллергена
• Пациенты с тяжелыми сердечно-сосудистыми заболеваниями, такими как ишемическая болезнь сердца или жизнеугрожающие аритмии

Антагонисты H₁-рецепторов гистамина (антигистаминные препараты) и трициклические антидепрессанты могут влиять на результаты кожной пробы. У пациентов, принимающих эти препараты, перед исследованием следует предусмотреть период отмены или перейти на анализ сывороточного IgE к конкретному аллергену.

Q Какие меры предосторожности нужны при проведении кожных проб?

A

Для подтверждения надежности исследования одновременно проводят положительный и отрицательный контроль. У пациентов с плохо контролируемой бронхиальной астмой или с риском анафилаксии следует осторожно оценить целесообразность проведения и рассмотреть переход на анализ сывороточного IgE. Поскольку антигистаминные препараты и трициклические антидепрессанты влияют на результаты, перед исследованием обязательно уточнять принимаемые лекарства.

5. Сравнение методов обследования и их выбор

Сравнение характеристик 4 методов обследования

Обследование	Что оценивается	Чувствительность при VKC	Страховое покрытие	Особенности
Общий IgE в слезе (Allerwatch)	Местная аллергическая предрасположенность глаз	94.7%	Да, просто	Можно определить в тот же день в амбулатории
Сывороточный IgE, специфический к аллергену	Системная аллергическая предрасположенность и определение причинного антигена	—	Да (до 13 позиций)	Полезен для определения причинного антигена
Кожная проба	Системная аллергическая предрасположенность	—	Да	Риск анафилаксии
Тест на эозинофилы	Местная аллергическая реакция в глазу	—	есть	необходим для окончательного диагноза

Алгоритм обследования в клинической практике

Ниже приведена базовая схема обследования в клинической практике¹⁾.

1. Заподозрить аллергию по клиническим признакам (клинический диагноз): оценить такие признаки, как зуд, покраснение и папиллярная гиперплазия
2. Подтвердить аллергическую предрасположенность (клинический окончательный диагноз): подтвердить предрасположенность по IgE в слезе или сывороточному аллерген-специфическому IgE. Если нужно определить причинный аллерген, полезен сывороточный IgE
3. При необходимости поставить окончательный диагноз (окончательный диагноз): подтвердить местную аллергическую реакцию в глазу с помощью теста на эозинофилы

Преимущество теста на IgE в слезе в том, что результат можно получить в тот же день в амбулаторных условиях, однако следует учитывать риск ложноотрицательных результатов при SAC/PAC. Если кожную пробу трудно выполнить из-за риска анафилаксии или по другим причинам, переходят к исследованию сывороточного аллерген-специфического IgE.

6. Подробно о принципах теста и тесте на эозинофилы

IgE и немедленная аллергическая реакция

IgE — это центральный иммуноглобулин при немедленной аллергической реакции (I типа). Оно связывается через высокоаффинный рецептор IgE (FcεRI) на поверхности сенсибилизированных тучных клеток и базофилов. Когда антиген снова проникает в организм, происходит сшивание IgE, возникает дегрануляция и высвобождаются медиаторы воспаления, такие как гистамин и лейкотриены.

В глазу в конъюнктиве присутствует много тучных клеток, и эта реакция вызывает такие аллергические симптомы, как покраснение, зуд и слезотечение. Общий уровень IgE в слезе отражает степень местной сенсибилизации глаза.

Принцип иммунохроматографии

Принцип иммунохроматографического метода, используемого в AllerWatch для IgE в слезе, следующий.

• IgE в слезе связывается с меченным коллоидным золотом антителом против человеческого IgE на полоске
• Он перемещается вдоль полоски за счет капиллярного эффекта
• Иммобилизованное на тестовой линии антитело захватывает IgE, образуя окрашенную линию
• Если IgE присутствует в количестве выше определенного порога, окрашенная линия становится видимой и результат оценивается как положительный

Методы измерения IgE в сыворотке

Для измерения антиген-специфического IgE в сыворотке используют следующие методы.

• Метод ImmunoCAP (флуороферментный иммуноанализ): наиболее распространенный количественный метод. Высокочувствительное измерение возможно на очень малом объеме образца
• Метод MAST (метод CAP-RAST): метод выявления с использованием иммобилизованного аллергена
• Количественные значения выражают в UA/mL (или kU/L), и 0,35 kU/L и выше часто считают положительным результатом

Исследование эозинофилов (окончательный диагноз)

Исследование эозинофилов — это метод, при котором соскоб со слизистой конъюнктивы окрашивают по Ханзелу, а затем под световым микроскопом определяют наличие эозинофилов в мазке. Если под микроскопом подтверждается хотя бы один эозинофил, результат считают положительным и аллергическое заболевание конъюнктивы диагностируют окончательно.

Если во время взятия образца наблюдается кровотечение, возможно попадание клеток крови в образец, поэтому для оценки следует повторно исследовать другой глаз.

Эозинофилы чаще выявляются при тяжелых случаях (VKC・AKC), а при SAC/PAC могут не обнаруживаться. Это применяют, когда требуется окончательный диагноз или объективная оценка тяжести.

7. Последние исследования и будущие перспективы

Медицинское уведомление

Ниже приведены материалы, которые в настоящее время находятся на стадии исследования или разработки и могут отличаться от стандартных обследований, доступных в обычных офтальмологических амбулаториях. Это справочная информация для специалистов о будущих медицинских достижениях.

Определение антиген-специфического IgE в слезе

Продолжаются исследования и разработка наборов для измерения специфического IgE в слезе (например, специфического IgE к кедру). Если помимо общего IgE слезы удастся напрямую определить местный сенсибилизирующий аллерген в глазу, это позволит диагностировать причинный аллерген в тот же день на приёме без забора крови. На данный момент это всё ещё находится на стадии исследований.

Оценка тяжести с помощью биомаркеров

Изучается возможность использования биомаркеров в слезной жидкости, таких как periostin, eotaxin и TARC (CCL17), для оценки тяжести. В частности, periostin привлекает внимание как показатель воспаления Th2, и предполагается, что он может отражать активность заболевания при VKC и AKC⁴⁾.

Мониторинг титра антител при аллерген-иммунотерапии

Продолжаются исследования по мониторингу изменений титра специфических IgE-антител в сыворотке для оценки эффективности сублингвальной и подкожной иммунотерапии при аллергии на пыльцу кедра⁵⁾. Сообщалось, что титр IgE-антител после иммунотерапии временно повышается, а затем снижается, и также рассматривается возможность применения этого подхода для мониторинга IgE в слезе.

Аллергологическое обследование у детей

При аллергических конъюнктивальных заболеваниях у детей, особенно VKC, проведение кожных тестов может быть затруднено, а слезный IgE и сывороточный IgE полезны. Необходимы крупномасштабная оценка чувствительности и специфичности каждого теста у детей, а также исследования рекомендуемых процедур обследования⁶⁾.

8. Литература

1. 日本眼科アレルギー学会診療ガイドライン作成委員会. アレルギー性結膜疾患診療ガイドライン（第3版）. 日眼会誌. 2021;125(8):741-785.
2. 庄司純, 内尾英一, 海老原伸行, 大橋裕一, 大野重昭, 岡本茂樹, 他. アレルギー性結膜疾患診断における自覚症状，他覚所見および涙液総IgE検査キットの有用性の検討. 日眼会誌. 2012;116(5):485-493. http://journal.nichigan.or.jp/Disp?mag=0&number=5&start=485&style=abst&vol=116&year=2012.
3. 岡本茂樹, 内尾英一, 海老原伸行, 他. 2017年度日本眼科アレルギー学会アレルギー性結膜疾患実態調査. 日眼会誌. 2022;126(7):625-635.
4. Fujishima H, Okada N, Matsumoto K, Fukagawa K, Igarashi A, Matsuda A, Ono J, Ohta S, Mukai H, Yoshikawa M, Izuhara K. The usefulness of measuring tear periostin for the diagnosis and management of ocular allergic diseases. J Allergy Clin Immunol. 2016;138(2):459-467.e2. doi:10.1016/j.jaci.2015.11.039.
5. 鈴木茂伸, 堀口裕正, 遠藤昌夫. スギ花粉症の舌下免疫療法とアレルゲン特異的IgE抗体価の推移. アレルギー. 2018;67(6):704-711.
6. Leonardi A, Bogacka E, Fauquert JL, Kowalski ML, Groblewska A, Jedrzejczak-Czechowicz M, et al. Ocular allergy: recognizing and diagnosing hypersensitivity disorders of the ocular surface. Allergy. 2012;67(11):1327-37. doi:10.1111/all.12009. PMID:22947083.